噬胞菌DW3几丁酶基因的克隆

用合成的寡核苷酸探针从弯曲杆菌基因组文库中筛选 到几丁酶基因阳性克隆，并测定了全基因的核苷酸序列。其编码区为1200bp，编码400个氨基酸的前体，推测其N端有一约30个氨基酸的分泌信号肽。比较发现它与其它来源几丁酶基因的碱基序列差异较大，与环状芽胞杆菌几丁酶基因催化区有52%的同源性，是一个未报道的新基因。进行了几丁酶基因在大肠杆菌中的表达研究，环状芽胞杆菌几丁酶基因在大肠杆菌的不同菌株中表达水平不同，其表达不受几丁质诱导。几丁酶活性平均分布于胞外、胞周间质和胞内，其胞外酶活性与原供体菌相当。酶的最适作用浊度是50℃。弯曲杆菌几丁酶基因未能在大肠杆菌中表达出有活性的几丁酶。以上结果为稻瘟病菌的防治奠定了基础。