冠心病血瘀证相关循环 miRNA对机体内稳态调节的影响

Cardiovascular disease will cause circulating miRNAs expression changes. Circulating miRNAs play important roles on the physiology and pathology of the disease process. It is not clear about the relationship between the circulating miRNA and blood stasis syndrome of coronary heart disease（CHD）. This study tries to use deep sequencing, RT-qPCR and bioinformatics analysis to built circulating miRNA fingerprint of blood stasis syndrome of CHD. And to explore whether circulating miRNA fingerprint can become a good, non-invasive biomarkers for clinical testing. Furthermore,blood stasis syndrome of CHD as non-communicable diseases, is closely related to the body's internal homeostasis disorders. Through systems biology approaches, this study intends to try initially built a circulating miRNA homeostatic regulation network model of blood stasis syndrome of CHD. Emphasis on the role of circulating miRNA in homeostasis regulation, early detection, and the use of pharmaceutical intervention, on the one hand, contribute less incidence of heart disease, on the other hand can also prevent serious incidents caused by cardiovascular homeostasis Overkill.

心血管疾病会造成循环miRNA表达的改变，并对疾病的发生发展起着重要的影响。循环miRNA与冠心病血瘀证的关系目前尚不清楚。本研究拟通过深度测序、RT-qPCR及生物信息学分析来初步构建冠心病血瘀证的循环miRNA指纹表达图谱，探讨其是否可成为一种良好的、非侵入的生物标记物用于临床检验，为临床冠心病血瘀证的微观辨证及疗效判定提供新的、更全面的依据。而且冠心病血瘀证作为非传染性疾病，与机体的内稳态失衡密切相关，现有的研究对冠心病血瘀证稳态调节关注不够。本研究拟通过系统生物学的方法，尝试在原有的冠心病血瘀证血浆、尿液代谢组学的研究基础上初步构建循环miRNA对冠心病血瘀证内稳态干扰的初始网络模型，探讨循环miRNA对冠心病血瘀证内稳态调节的影响。重视内稳态调节中循环miRNA的作用，尽早检出及利用中医药干预，一方面有助于减少心病的发病率，另一方面还可以防止由于内稳态过度破坏造成的心血管恶性事件。

冠心病血瘀证作为非传染性疾病，与机体的内稳态失衡密切相关。心血管疾病会造成循环miRNA表达的改变，并对疾病的发生发展起着重要的影响。循环miRNA与冠心病血瘀证的关系目前尚不清楚。本研究通过miRNA芯片，RT-qPCR及生物信息学分析，探索改进了血液循环miRNA检测中的技术瓶颈，并初步构建了循环miRNA对冠心病血瘀证内稳态干扰的初始网络图，探讨循环miRNA对冠心病血瘀证内稳态调节的影响。miRNA网络分析的关键点在于miRNA差异表达的检测。该方法需要选择合适的内参进行校正和标准化，以减少检测标本间的差异。对于冠心病血浆样本而言，目前仍缺乏公认的理想内参分子。本课题组通过文献检索、芯片筛选、RT-qPCR及NormFinder与BestKeeper分析软件，最后筛选出miR-6090和miR-4516两个内参，它们在血浆丰度、稳定性及标准化效果上均优于现有的内参分子RNU6B。因此，本课题组提出可以通过外源线虫cel-miR-39及内源miR-6090/4516联用的方式来解决血浆miRNA实时荧光定量PCR中缺乏合适内参的问题。然后，课题组通过构建miRNA调控网络，对比大鼠心脏/血浆miRNA及人血浆miRNA的差异，发现冠心病血瘀证通过影响miRNA表达，从而使包括能量代谢，血管内皮来源，血小板来源，细胞增殖与凋亡来源，纤维化来源，细胞信号传导，粥样硬化来源，脂代谢来源在内的相关基因与信号通路发生主要改变。而心肌细胞来源、肌肉细胞来源、炎症来源、PBMC来源、血浆微泡来源的miRNA改变并不明显，没有显著增多。揭示了冠心病血瘀证的病理机制在于血管内皮生长因子，血小板因子诱发的能量代谢障碍、纤维化与细胞增殖/凋亡程序的启动。发展到后期才会出现心肌损伤，炎症反应等代谢通路的改变。这有利于我们更好的认识冠心病血瘀证的证侯本质。