TLR5配体在新城疫亚单位疫苗免疫应答中的黏膜佐剂作用研究

TLR5分子对其配体鞭毛蛋白的识别，可激发机体的固有免疫应答，从而启动并增强了针对外源抗原的免疫应答水平，显示出鞭毛蛋白的免疫佐剂效应，但类似研究仅限于哺乳动物模型，在家禽方面的研究未见报道。而鞭毛蛋白可被鸡TLR5功能性识别，可活化免疫系统产生固有免疫应答。本项目在前期工作的基础上，拟通过果蝇表达系统表达出具有生物学功能的肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白（FliC）与新城疫病毒融合蛋白（F）的重组融合蛋白，通过体外体内试验，观察分析重组融合蛋白与F蛋白两者间所激发的固有免疫应答和获得性免疫应答规律以及对鸡的免疫保护作用之间存在的差异，以论证鞭毛蛋白被TLR5识别后，在重组融合蛋白免疫应答过程中具有活化固有免疫系统，进而增强针对外源抗原获得性免疫应答，具有黏膜免疫佐剂作用的假说，并阐明其佐剂效应，以期为家禽新型亚单位黏膜疫苗的研制提供新认识和新途径。

鞭毛蛋白可被TLR5识别，激发机体的固有免疫应答，进而启动获得性免疫应答，在哺乳动物模型中显示出良好的佐剂效应，而其佐剂效应在家禽中的研究却鲜见报道。此外，我们对鞭毛蛋白发挥佐剂效应的机制也知之甚少。本项目以毕赤酵母系统成功表达了具有活性的新城疫病毒F蛋白；以pTrc99a鞭毛表达系统成功表达了具有天然活性的鞭毛蛋白FliC；以原核表达系统成功表达了流感病毒HA与FliC的重组融合蛋白HA1-2-FliC。体内和体外试验分析了鞭毛蛋白诱导固有免疫应答的能力。以小鼠和SPF鸡为实验动物，分析了鞭毛蛋白增强激发针对外源性抗原获得性免疫应答的能力，表明鞭毛蛋白对新城疫亚单位疫苗和商品化疫苗等具有明显的佐剂效应。在此基础上，进一步探究了鞭毛蛋白作为佐剂的机理，首次发现鞭毛蛋白89-96位氨基酸是其发挥佐剂效应的关键位点。本研究为家禽新型亚单位黏膜疫苗的研制提供新认识和新途径。