基于桂枝汤方证相应关系的营卫不和病机与HSP90α、11β-HSD1的相关性研究

Modern study on Ying Wei Disharmony Syndrome is very fewer. Based on inverse docking screening, we found that heat shock protein 90α(HSP90α) and corticosteroid 11 beta dehydrogenase isozyme 1(11β-HSD1) were important targets of the active ingredients contained in Guizhi decoction. 11β-HSD1 can transfer cortisone into the hydrocortisone which has stronger activity (corticosterone in rodents) regulating the effects of glucocorticoid receptor. The corresponding relationship of Guizhi decoction and Ying Wei Disharmony Syndrome is a typical example of Prescriptions Corresponding to Syndromes theory. Based on Prescriptions Corresponding to Syndromes theory, we hypothesized that HSP90α, 11β-HSD1, glucocorticoid (GC), glucocorticoid receptor (GR) is related to the mechanism of Ying Wei Disharmony Syndrome. To test this hypothesis, we make the model rats of Ying Wei Disharmony Syndrome, and using technologies such as molecular biology, ELISA to observe the changes of HSP90α, 11β-HSD1, GC, GR and the function of Guizhi decoction. This task will illustrate the mechanism of Ying Wei Disharmony Syndrome, and provide a new approach for TCM research.

目前从分子生物学角度针对营卫不和病机的研究较少。前期我们采用反向分子对接技术对桂枝汤所含活性成份的作用靶点进行筛选，发现热休克蛋白90α（HSP90α）、11β-羟化类固醇脱氢酶I型（11β-HSD1）是其重要的作用靶点。11β-HSD1在人体内把可的松转化为活性更强的氢化可的松（在啮齿类动物为皮质酮），发挥糖皮质激素(GC)作用。由于桂枝汤与营卫不和的对应关系是体现《伤寒论》方证相应理论的典型，因此我们推测HSP90α、11β-HSD1、GC及糖皮质激素受体（GR）与营卫不和的机制具有内在联系。为证实这一假说，我们拟通过建立大鼠营卫不和模型，用Western Blot、ELISA等技术，观察模型大鼠体内HSP90α、11β-HSD1、GC、GR的变化以及桂枝汤的干预作用。本课题以反向分子对接技术得到桂枝汤的作用靶点来阐明营卫不和的内部机制，为中医病机研究提供新的思路和方法。

中医证的研究是中医现代化的一个难点和热点，本项目根据中医经方的方与证之间具有确定的相关性，认为可以采用现代生物科学中的反向分子对接技术以方测证来研究中医证的实质。以桂枝汤为例，前期我们采用反向分子对接技术对靶点数据库进行筛选，发现HSP90α、11β-HSD1为桂枝汤的潜在作用靶点，因而在本项目中我们设计桂枝汤干预营卫不和模型大鼠的动物实验考察HSP90α、11β-HSD1与桂枝汤治疗营卫不和证的关系，研究结果显示营卫不和模型组大鼠下丘脑、外周血单核细胞中HSP90α的表达与正常组大鼠相比较显著下降，而桂枝汤的干预可以显著恢复HSP90α的表达；而营卫不和模型组大鼠脂肪组织、肌肉组织及下丘脑中11β-HSD1的表达与正常组大鼠相比较显著升高，而桂枝汤的干预可以显著降低11β-HSD1表达。本项目动物实验的关键数据支持并证实了HSP90α、11β-HSD1与营卫不和证具有相关性。HSP90α和11β-HSD1均与糖皮质激素发生相互作用，我们进一步考察了桂枝汤干预营卫不和模型大鼠动物实验中糖皮质激素及糖皮质激素受体的变化情况，结果营卫不和模型组大鼠血浆中糖皮质激素水平与正常组大鼠相比较显著下降，而桂枝汤的干预可以显著恢复血浆中糖皮质激素水平；而糖皮质激素受体在营卫不和模型组大鼠和正常组之间无显著性差异。以上结果提示营卫不和病机与HSP90α和11β-HSD1与糖皮质激素发生相互作用下使得血浆糖皮质激素水平显著下降有关，而桂枝汤的干预可以恢复血浆糖皮质激素水平。本项目的科学意义在于证实了反向分子对接技术作为一种高效靶点筛选手段，可以为中医经方的方证关系研究提供新的技术途径，思路和方法。