基于自噬小体-肿瘤免疫原性理论探讨复方肠泰的抗肿瘤免疫机制

Colorectal cancer seriously harm people's health in China. Our previous studies found that clinical application of Fufangchangtai decoction can improve clinical symptoms in patients with colorectal cancer, reduce the levels of tumor markers, and increase the T lymphocyte numbers. Meanwhile, we also found that Fufangchangtai can induce autophagy of colorectal tumor cells. However, the mechanism of Fufangchangtai improve the immune function is not clear.. The core of anti-tumor immune response is the immunogenicity of the tumor cells. Autophagosomes released by tumor cells is closely related to the tumor immunogenicity. Tumor-derived autophagosomes may be an effective carrier of tumor antigen. Therefore, based on the previous research, this study will focus on whether autophagy of colorectal tumor cells induced by Fufangchangtai can enhance tumor immunogenicity by cross-presentation and activate specific anti-tumor immune response. This study could provide experimental results and theoretical basis to research of traditional Chinese medicine affecting the antitumor immune response.

大肠癌严重危害我国人民身体健康。申请者前期研究发现，临床应用复方肠泰能够改善大肠癌患者临床症状，降低肿瘤标记物的水平，并且提高T淋巴细胞分型为代表的多项免疫指标。同时，亦发现复方肠泰能够诱导大肠癌细胞自噬水平提高。但复方肠泰是通过何种机制提高免疫功能并发挥其抗肿瘤效应，尚不清楚。. 抗肿瘤免疫应答的核心是肿瘤细胞免疫原性，而肿瘤细胞释放的自噬小体与肿瘤细胞免疫原性密切相关，肿瘤细胞来源的自噬小体可能是肿瘤抗原的有效载体。为此，本项目将在前期研究基础上，以肿瘤细胞自噬小体的抗原提呈功能为切入点，将复方肠泰诱导大肠癌细胞自噬与肿瘤细胞免疫原性及特异性抗肿瘤免疫应答相联系，从肿瘤免疫学原理来阐明复方肠泰的抗肿瘤作用机制。为中药在抗肿瘤免疫应答这一肿瘤研究热点领域的作用提供实验结果和理论依据。

临床观察具有健脾益气活血解毒作用的复方肠泰与化疗联用对大肠癌患者的疗效较好，提高抗肿瘤免疫功能可能是其重要效应。前期实验证实复方肠泰可提高机体免疫功能，并诱导自噬现象发生；肿瘤细胞的自噬及其形成的自噬小体与pAPC的交叉提呈有直接的关系，提高肿瘤细胞的自噬率，发挥自噬小体的抗原呈递功能，可显著提高肿瘤细胞的免疫原性、增强pAPC交叉提呈肿瘤抗原的能力。本课题组将复方肠泰诱导大肠癌细胞自噬与肿瘤细胞免疫原性及特异性抗肿瘤免疫应答相联系，采用①小鼠大肠癌细胞CT26.WT为细胞株，构建检测自噬活性和肿瘤免疫原性的模型，观察复方肠泰对肿瘤细胞自噬小体释放的影响；②利用激光共聚焦、FACS、ELISA等技术，以OVA为模式抗原探讨复方肠泰诱导的自噬小体对肿瘤抗原交叉提呈的影响。经过三年的研究工作，基本完成研究目标。在成功构建表达GFP-LC3融合蛋白的细胞株、表达模式抗原OVA的重组细胞株的基础上，收集肿瘤细胞的自噬小体，体外检测OVA特异性OT1细胞的增殖和免疫应答；同时，建立小鼠荷瘤模型，观察荷瘤小鼠肿瘤大小、生存时间等指标；证实复方肠泰可通过诱导大肠癌细胞释放自噬小体增强肿瘤抗原交叉提呈。本课题证实了复方肠泰可通过诱导大肠癌细胞释放自噬小体以增强肿瘤抗原交叉提呈，从而达到杀伤肿瘤细胞的作用。这一结果为临床复方肠泰的使用、开发提供理论依据。