微泡靶向传递siMDR1基因及化疗药物在睾丸肿瘤治疗中的应用

临床上恶性睾丸肿瘤化疗效果不佳是影响治疗效果的重要原因，MDR1基因编码的P-gp高表达引起的外排作用使化疗药物难以通过血睾屏障的血管内皮细胞，进入肿瘤细胞发挥药效。本课拟构建siMDR1小干扰RNA基因片段，采用基因沉默的方法抑制血管内皮细胞中P-gp的表达，从而使化疗药物容易通过血睾屏障，但高效定向的体内基因转染不易实现。超声微泡的应用为实现体内靶向转染siMDR1基因和定向释放化疗药物提供了新途径，PLGA微泡携带的siMDR1基因及顺铂，由静脉注入可通过循环到达睾丸，在超声作用下靶向破坏微泡的同时实现血睾屏障的可逆开放及siMDR1基因体内转染抑制P-gp表达，并降低了化疗药物带来的全身副作用，有效杀灭肿瘤，提高睾丸肿瘤治愈率。本课题合理利用超声微泡的特点用于体内siMDR1基因转染逆转睾丸肿瘤耐药，提高化疗效果，在睾丸肿瘤治疗中有着可观的前景和价值。

本课题构建携带多药耐药基因1（MDR1）特异性小干扰RNA的真核表达质粒pSEB-siMDR1，采用基因沉默的方法抑制血管内皮细胞中P-糖蛋白的表达和功能，从而促进化疗药物进入睾丸组织中。但高效定向的体内基因转染是研究的关键点，超声微泡的应用为实现体内靶向转染siMDR1基因提供了一种可靠的新方法。携带pSEB-siMDR1质粒的微泡，由静脉注入可通过循环到达睾丸，在超声作用下破坏微泡实现siMDR1小干扰RNA体内向睾丸毛细血管内皮细胞的靶向转染，抑制P-糖蛋白表达和功能，为化疗药物进入睾丸内有效杀灭肿瘤提供了条件，从而提高睾丸肿瘤治愈率。通过本课题的研究，获得如下结果： 1.重组pSEB-siMDR1真核表达质粒构建成功，能有效抑制MDR1基因和蛋白的表达。2.适合的超声强度和暴露时间能够明显促进质粒对细胞的转染，并不会对细胞存活产生明显的影响。超声与微泡造影剂同时存在的情况下，能显著提高pSEB-siMDR1质粒对L2RYC细胞的转染效率，转染后内源性MDR1 mRNA和P-糖蛋白的表达及功能被抑制，L2RYC对化疗药物的敏感性增加。3. 超声联合微泡能促进pSEB-siMDR1对大鼠睾丸毛细血管的转染，抑制P-糖蛋白的表达及其药泵功能，使化疗药物更容易进入睾丸组织内。4. 超声联合微泡靶向转染pSEB-siMDR1能够提高睾丸肿瘤的化疗效果，增加肿瘤细胞的死亡，使荷瘤鼠存活率提高。本研究应用超声微泡体内转染siMDR1基因逆转睾丸肿瘤耐药，提高化疗效果，在睾丸肿瘤治疗中将有着可观的前景和价值。