梧桐花粉新过敏原的研究

Platanus acerifolia pollen is one of the major pollen allergen in many areas in China (including Beijing), which can cause serious allergy including rhinitis, asthma and so on. At present, about three allergens were reported to be identified from Platanus acerifolia pollen. Our previous study identified another four novel potential allergens from Platanus acerifolia pollen by a combination of second-generation sequencing technology and sequences comparison. The current projects firstly express and purify these potential allergens in E.coli system. Monoclonal antibodies against these allergens are also produced. The natural counterpoints of these allergens are also purified by affinity chromatograph. The allergenicities of these allergens are tested by ELISA, immune-blotting, basophils activation test，skin prick test and T cell proliferation assay. The identified novel Platanus acerifolia pollen allergens can give important allergens information for the development of diagnositic reagent and vaccine for Platanus acerifolia pollen allergy.

法国梧桐(Platanus acerifolia)花粉是我国很多地区（包括北京在内）春季播散的重要花粉变应原之一,可引起变应性鼻炎、哮喘等I型变态反应性疾病。目前已经从法国梧桐花粉中鉴定出三个过敏原成分。我们前期研究通过二代测序和序列比对在法国梧桐花粉中鉴定并克隆出4个新的潜在过敏原蛋白。本项目通过在大肠杆菌表达系统中表达，纯化获得法国梧桐花粉潜在新过敏原蛋白。在此基础上，制备潜在新过敏原蛋白单克隆抗体，通过亲和层析分离法国梧桐花粉天然新过敏原蛋白。通过ELISA，免疫印迹，嗜碱性粒细胞激发试验，皮肤点刺试验研究新过敏原的致敏性。从而对法国梧桐花粉过敏原成分信息有个全面的认识，为法国梧桐花粉过敏原组分解析诊断和进一步的个体化脱敏治疗疫苗的研制奠定基础。

法国梧桐花粉是我国春季播散的重要花粉变应原之一,可引起变应性鼻炎、哮喘等I型变态反应性疾病。然而梧桐花粉中的致敏组分尚不完全清楚。在前期研究工作的基础上，按照项目计划要求顺利进行后续研究工作。项目不仅通过二代测序结果联合序列比对方案鉴定出异黄酮还原酶（isoflavone reductase）、前纤维蛋白（profilin）、病程相关蛋白（pathogenesis-related protein），还通过多种色谱组合纯化得到烯醇化酶（enolase）和磷酸丙糖异构酶（triosephosphate isomerase）。通过一系列致敏性验证实验明确了这5种新过敏原蛋白的IgE结合率分别为35%、77%、22%、32%和41%，并通过序列比对、蛋白质三维空间模型构建、保守区域分析等对新过敏原的结构特征进行了分析。这5种新过敏原的基因全长序列信息均已录入NCBI Genbank数据库中，注册号分别为OK323205、OK323206、OK323207、OK323202和OK323203，且这5种新过敏原均已提交至世界卫生组织和国际免疫学会联合会过敏原命名小组委员会进行过敏原标准化命名。本项目在免疫学和变态反应学专业领域SCI收录的期刊Allergy Asthma & Immunology Research、World Allergy Organization Journal、Clinical Reviews in Allergy & Immunology等发表文章8篇，其中第一标注2篇，第二标注6篇。研究结果极大的丰富了梧桐花粉中的致敏组分信息，为梧桐花粉过敏患者的分子诊断方法建立和个体化脱敏治疗疫苗的研制提供了材料和依据。