nm23-H1调控microRNAs逆转肺癌转移表型的分子机制研究

我们在前期研究中分析了不同转移潜能肺癌细胞株的miRNA表达谱，发现了一组与肺癌转移相关的miRNA。在此基础上，本项目拟应用miRNA芯片和real-time PCR方法筛选和验证受nm23-H1调控并与肺癌转移相关的miRNA；构建miRNA启动子报告基因载体，通过启动子活性分析、CHIP和综合突变分析方法研究nm23-H1调控miRNA表达的分子机制；应用Western blot方法研究miRNA对nm23-H1途径相关基因表达的影响；构建miRNA表达载体和合成特异性抑制剂，应用Transwell、流式细胞术,荧光活体成像和动物模型等方法在体外和体内观察miRNA对肺癌细胞侵袭转移的影响。本研究将在转录后调控层面揭示并丰富nm23-H1逆转肺癌转移表型的分子机制，为阐明肺癌转移的分子机理和开发干预肺癌转移的抗肿瘤药物提供理论依据和实验依据，具有重要的理论意义和应用前景。

本课题对项目任务书中的研究内容进行了深入细致的研究，达到了预期研究目标。应用miRNA表达谱芯片筛选到一组nm23-H1调控并参与肺癌侵袭转移过程的miRNA，并进行了real-time PCR验证。深入研究发现：nm23-H1过表达可上调mir-610、mir-132、mir-449a和mir-223的表达水平，mir-610、mir-132、mir-449a和mir-223在高转移肺癌细胞中的表达水平显著低于其在低转移肺癌细胞中的表达水平，它们在转移淋巴结组织的表达水平显著低于原发肿瘤组织中的表达水平；mir-610可抑制肺癌细胞的增殖和侵袭能力，GJA3为miR-610的靶基因；mir-132可抑制肺癌细胞的侵袭能力，ZEB2为mir-132的靶基因，ZEB2在高转移肺癌细胞中高表达，在转移淋巴结组织中的表达水平显著高于其在原发肿瘤组织中的表达水平，将ZEB2过表达可促进肺癌细胞的侵袭能力，同时干扰mir-132和ZEB2表达可削弱单独干扰mir-132引起的细胞侵袭能力的增强作用，mir-132通过靶向调控ZEB2表达抑制肺癌细胞的侵袭；nm23-H1可激活miR-449a启动子活性，miR-449a可抑制肺癌细胞的增殖，促进细胞凋亡，抑制细胞的侵袭能力，建立了miR-449a抑制肺癌转移的动物模型，miR-449a可抑制肿瘤的形成和转移， miR-449a的靶基因为MAP2K1，还调控p-MEK、p-ERK、p-c-fos、p-c-jun和MMP2的表达水平，在miR-449a启动子上找到了3个可能的AP1结合位点，组蛋白甲基化和乙酰化修饰影响miR-449a的表达水平；mir-223在肺癌和食管癌细胞中均高表达，在肺癌和食管癌组织中的表达水平显著低于其在正常组织中的表达水平，ARTN 为mir-223的靶基因，干扰ARTN表达可降低细胞侵袭能力，mir-223过表达可降低MMP2和MMP9的蛋白表达水平。通过课题研究，发表了2篇SCI论文，3篇核心期刊论文，培养了3名博士研究生和3名硕士研究生。