益气活血中药对肠－脑－肝轴葡萄糖稳态调节系统功能影响的分子机制及药效物质基础研究

以中医药的整体治疗观念为指导，结合T2DM发病过程中能量代谢稳态失衡，葡萄糖、脂质代谢紊乱的基本病理特征，选择肠－脑－肝轴（GBL轴）这一全新血糖稳态调控系统，研究益气活血类中药（黄芪、丹参及补阳还五汤）对T2DM中GBL轴葡萄糖稳态调节系统功能的影响， 建立多靶器官（组织）微透析取样－现代分析手段（LC-MS/MS、HPCE-MS、GC-MS、LC-NMR等）联用技术，对GBL轴血糖稳态调控系统中葡萄糖、游离脂肪酸、胰岛素、瘦素等信号分子群和益气活血类中药（黄芪、丹参及补阳还五汤）成分在体内的代谢变化进行动态跟踪检测、定量分析，借助化学计量学等手段将正常、病理、给药后GBL轴调控体系中信号分子群的动态变化信息和中药提取物中的有效成分进行分类比较，确定中药提取物中的 "关联"成分（群），揭示和发现益气活血类药物通过多器官、多信号通路中葡萄糖、脂肪等物质代谢调控的分子机制及药效物质基础研究。

本课题组对黄芪和丹参进行了化学分离和鉴定工作，其中在黄芪中共分离及制备到7种皂苷类化合物、8种黄酮类化合物；在丹参中分离及制备到13种脂溶性成分。建立了微透析多靶器官取样-LC/MS 联用分析技术、微透析取样-在线二维涡流LC-MS联用分析技术，对spinosin、Ginsenoside及puqietinone等多种活性化合物进行了多靶器官、组织的药代动力学研究。对益气活血经典方补阳还五汤活性成分体内代谢及变化规律进行了深入研究，通过运用 RRLC-ESI-QTOF/MS方法检测到补阳还五汤在大鼠尿液中 12 个原型成分和 38个代谢物，分析时间不超过 20 min。已鉴定出的代谢物中主要来自黄芪、当归和川芎。运用冠状动脉左前降支结扎法及大脑中动脉线栓线法，成功建立了大鼠心肌梗死和大鼠脑缺血-再灌注模型，并观察了桃仁-红花提取物对心肌梗死大鼠的保护作用，结果显示桃仁-红花提取物具有明显的心肌保护作用。运用微透析-酶标仪-微透析分析仪联用技术对丹参对脑缺血再灌注大鼠模型核心缺血区/半暗带区能量代谢的影响进行了研究，结果表明丹参能通过改善脑能量代谢而发挥脑缺血保护作用。运用微透析-LC-MS法研究了黄芪对大鼠脑缺血组织乙酰胆碱和胆碱代谢的影响，发现黄芪能通过改善胆碱能神经功能，来发挥脑缺血的保护作用。