miR-183影响子宫内膜异位症间质细胞生长及侵袭功能的分子机制

miR-183是我们应用miRNA芯片筛选出的在内异症异位、在位内膜中表达均显著降调的miRNA。预研发现：miR-183表达在异位、在位内膜间质细胞（ESC）中显著降调，对其抑制导致ESC侵袭性增加而凋亡减少；生物信息学预测FGF9是miR-183的潜在靶基因，miR-183抑制后FGF9表达上调。结合文献：FGF9高表达于异位内膜，且具促ESC增殖、卵巢癌细胞侵袭性作用，提示miR-183通过调控FGF9参与内膜异位生长。本研究拟观察miR-183过表达、表达沉默与ESC生长、侵袭功能改变，及FGF9表达变化的关系；进一步以FGF9为切入点，采用表达载体构建或RNAi技术，评判miR-183调控FGF9引起的ESC功能变化的机制；最后采用荧光素酶报告基因技术，论证miR-183对FGF9的调控作用。由于miR-183与内异症关系的研究未见报道，具源头创新性，可为内异症防治提供新的靶标。

子宫内膜异位症（内异症）是妇科常见疾病，其病因未明。微小RNA（miRNA）是一类长约22个核苷酸的非编码单链RNA分子，在发育、细胞增殖、凋亡和分化等重要生物学过程中起重要作用，与肿瘤发生等人类的疾病密切相关。本研究小组首先以内异症异位和在位内膜为研究对象，采用生物芯片技术分别筛选内异症异位内膜、在位内膜与同期正常内膜中的差异miRNAs，结果发现：miR-183在异位内膜和在位内膜中均表达下降，且降调幅度最大，qPCR验证结果与初筛结果一致，提示其在内异症中可能具有重要作用。为了验证该假说，通过过表达及沉默表达策略，从正反两方面探讨miR-183对人子宫内膜间质细胞功能的影响，结果显示：miR-183抑制后细胞侵袭和抗凋亡能力增强，而对细胞增殖无明显影响。从而获得了miR-183能够通过调节内膜间质细胞生长和侵袭性来发挥作用的证据。.已知miRNA通过调控下游多个靶基因参与细胞功能。我们首先采用了生物信息学分析的方法，预测miR-183 FGF9为可能的下游靶基因，但Luciferase实验结果否定了该推断。为了系统筛选出内异症中miR-183调控的下游靶基因，我们利用芯片检测技术筛选内膜间质细胞过表达miR-183后发生变化的下游靶基因，经筛选得到8个下调基因（ITGB1, AMIGO2, VAV3, PSEN2, LHFPL2, HS2ST1, AHSA2, UQCRB）。根据GO databases, pathway分析和pubmed文献报道，我们确定了4个与细胞粘附、细胞侵袭、细胞迁移密切相关的基因(ITGB1, AMIGO2, VAV3 and PSEN2)。经免疫印迹试验筛选发现：内膜间质细胞分泌ITGB1蛋白（integrin β1）和 AMIGO2，但无 VAV3 和 Presenilin 2 表达。进一步Luciferase试验及挽救实验证实：ITGB1是miR-183的下游靶基因，而对AMIGO2的调节仅通过间接方式起作用。本研究证实：miR-183的异常表达导致其对下游靶基因ITBG1的调节失衡，引起内膜间质细胞粘附和侵袭功能改变，从而导致内异症的发生。该研究阐明了miR-183致内异症的新病理机制，可为内异症的防治提供新的理论依据和潜在的干预靶标。研究基本按原计划完成，发表SCI 2篇，中文核心期刊1篇，培养研究生2名。