PPM1A调节TGF-β/smads信号通路在胰腺癌侵袭转移中的作用

胰腺癌是消化道恶性程度最高的肿瘤之一，预后极差。我们的前期研究表明TGF-β/smads信号通路的负性调控因子Ski和smad7参与胰腺癌的增殖转移，预实验发现该通路另一调控因子PPM1A在胰腺癌及肝转移灶中有表达，且与肿瘤转移及患者预后关系密切。我们推测在胰腺癌中PPM1A可通过TGF-β/smads信号通路调节胰腺癌细胞的生物活性。本课题拟通过基因沉默、基因导入、特异性抑制剂的方法研究PPM1A调节TGF-β/smads信号通路对胰腺癌细胞增殖、侵袭和转移的影响及其分子机制，并在裸鼠体内观察PPM1A对胰腺癌细胞浸润转移的影响，明确PPM1A在胰腺癌中的作用，为进一步明确胰腺癌的浸润转移的分子机制，寻找胰腺癌的新的治疗靶点提供重要的理论依据。

我们采用胰腺癌细胞株（SW1990，BxPC3）成功构建：1、稳定低表达PPM1A的胰腺癌细胞系（PPM1A shRNA）；2、过表达PPM1A的胰腺癌细胞系（pEGFP-N3-PPM1A ）分别在体外、体内水平检测PPM1A在胰腺癌中的作用及TGF-β-PPM1A信号通路对PPM1A的调节作用，并最终在大样本量人胰腺癌组织标本中验证我们的结论。.首先采用Western blot方法检测发现PPM1A表达在胰腺癌细胞株中高于正常胰腺细胞系。 在此基础上，我们采用慢病毒转染的方法，成功构建BxPC3和SW1990两株胰腺癌细胞的稳定干扰及过表达PPM1A的细胞系，采用CCK8、克隆形成、流氏细胞计数、Western blot和裸鼠皮下移植瘤模型等方法检测PPM1A对胰腺癌细胞增殖影响；采用划痕实验、Transwell小室实验和Western blot和 qPCR的方法检测PPM1A对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。在实验过程中，我们发现PPM1A表达变化可调节肿瘤血管生成和EMT而影响胰腺癌的生长及转移，同时加入TGF-β1，活化TGF-β/Smads信号通路，并检测TGF-β/Smads -PPM1A信号轴对胰腺癌细胞功能的调节作用。此外，我们收集复旦大学附属华山医院胰腺癌组织，检测PPM1A的表达与胰腺癌的关系，结果进一步证明，低表达PPM1A促进TGF-β/Smads信号通路活化，可有效的促进胰腺癌细胞的生长、转移和血管生成，可望成为胰腺癌治疗的新靶点，值得深入研究。