己稀雌酚影响胎鼠泌尿生殖系统形态及其睾丸引带机理的进一步研究

近年来研究表明，外源性雌激素（EEs）与当今人类泌尿生殖系统先天畸形等异常的发病率明显升高关系密切，但机理不明。己稀雌酚（DES）是经典的代表性EEs，它可引起多种泌尿生殖系统异常/畸形已得到许多研究证实。有关其机理方面，主要集中在对睾丸的研究上。近年来，我们力图从睾丸引带途径探讨EEs的致畸效应，睾丸引带是胚胎期与睾丸等泌尿生殖系统器官发育密切关联的重要睾丸外结构（尽管生后或已退化）。我们的前期研究在表明小鼠胚胎期暴露DES可致泌尿生殖系统形态发育异常的同时，也观察到DES对睾丸引带组织和细胞的形态、结构及功能等有明显影响。本项目拟进一步结合组织显微三维重建和组织、细胞以及蛋白、RNA转录等多层面及其相应技术深入探讨DES的致畸效应及可能的睾丸引带细胞信号通路。本研究可为后续及其它EEs的相关研究提供参考，并进一步确立从睾丸外研究EEs影响泌尿生殖系统发育的新途径。

当今，人类生育、生殖系统肿瘤及先天畸形等问题越来越严重。随着"成人疾病胎源说"和"睾丸发育不全综合征"以及外源性雌激素(EEs)对生殖发育的影响被广泛认同，探讨EEs对生殖系统发育的影响及机理意义凸显。.己稀雌酚(DES)是经典的代表性EEs，它可引起多种泌尿生殖系统异常/畸形已得到许多研究证实。有关机理方面，主要集中在对睾丸的研究上。本项目组多年来致力于从"睾丸引带"途径探讨EEs的致畸效应及机理。睾丸引带是胚胎期与睾丸等泌尿生殖系统器官发育密切关联的重要睾丸外结构。我们在前期研究的基础上结合组织显微三维重建和组织、细胞以及分子信号通路等多技术探讨了DES的致畸效应、机理及他们间的关系。获得了有意义的数据，增强了从睾丸外这条新途径研究EEs影响泌尿生殖系统发育的基础，推进了基础与临床表象相结合的系统性研究进程。.具体方面包括：1)通过组织及组织化学方法对小鼠不同发育阶段睾丸引带组织及主要细胞成分的变化进行了系统的形态学研究。2)进一步研究不同剂量DES对小鼠睾丸引带细胞活性的影响及可能机理。3)从细胞及蛋白水平研究了GPER在小鼠睾丸引带细胞上的存在及分布情况；再分别用ER和GPER阻断剂干预，研究GPER在EEs影响睾丸引带发育中的作用，从PKA和ERK1/2两个GPER相关的细胞信号传导通路研究DES对小鼠睾丸引带细胞的影响。4)探讨了PKC/PKA信号通路在相对低剂量DES影响睾丸引带细胞中的作用，进一步了解DES影响睾丸引带细胞增殖和收缩活性的机理。5)通过免疫组织化学，RT-PCR，免疫电镜等方法技术在组织细胞、亚细胞及基因水平对不同发育时期睾丸引带上可能存在的AR、ERα、ERβ、GPER等性激素受体进行了研究。6)分别利用不同浓度剂量的DES和INSL3作用于孕期小鼠(在体实验)和培养睾丸引带细胞(离体实验)，通过观察睾丸引带及细胞的形态结构变化，检测引带组织LGR8蛋白和mRNA的表达，探讨了EEs和INSL3影响睾丸引带发育的可能途径。为更全面地研究EEs影响生殖系统发育的可能途径(如INSL3-LGR8信号系统)提供了资料。7)结合组织学的计算机三维重建技术研究了在显微水平动态立体显示并测定泌尿生殖系统形态学参数的可行性。为将影响因素及过程和更精确的终点指标(组织水平的最终形态)联系在一起对比研究，回答临床问题提供了更精确的方法学基础。