从星形胶质细胞足突离子网络调控机制探讨安脑平冲方对脑出血脑水肿的作用机理

Studies had shown that malajustment ion network transport is the key factor to the formation of brain edema,and brain edema was the most important cause of "the second injury" after cerebral hemorrhage.High expression of ion transporter(NKCC1、Kir4.1、TRPV4)and AQP4 on astrocyte cell endfeet could impact the abnormal transport of related ion network when intracerebral hemorrhage(ICH) happened.Previous research has shown that annaopingchong decoction which based on the chongqishangni-brain xuanfu tongli disorders pathogenesis composition had shown the exact effect on encephaledema in ICH;the mechanism of this effect might associate with the regulation of astrocyte endfeet aquaporin. Therefore, the hypothesis is proposed in this experiment annaopingchong decoction could alleviate cerebral edema after intracerebral hemorrhage by intervening "abnormal expression of ion network transporter in astrocytes endfeet after intracerebral hemorrhage - ion network disorder".So in this study we will choose the methods of RT-PCR、Western blot, patch clamp technique, establish the experiment models both in vivo and in vitro, and observe dynamically the process of encephaledema formation and the effect of annaopingchong decoction against it, using malajustment ion networks transport on astrocyte endfeet as target.In order to clarify the target regulation effect of annaopingchong decoction on cerebral edema after intracerebral hemorrhage.

脑水肿是脑出血后“二次损伤”的最重要原因，而目前研究显示离子网络转运异常是脑水肿形成的关键。星形胶质细胞足突离子转运蛋白（NKCC1、Kir4.1、TRPV4）及水通道蛋白AQP4高表达，进而使相关离子网络异常转运，形成或加重脑水肿。前期研究表明以“冲气上逆-脑玄府通利失调”病机组方的安脑平冲方对脑出血脑水肿有确切疗效，机制与调节星形胶质细胞足突水通道蛋白相关。故本实验假设安脑平冲方通过干预“脑出血后星形胶质细胞足突离子转运蛋白异常表达-离子网络紊乱”减轻脑出血后脑水肿。进而本课题拟应用RT-PCR、Western blot、膜片钳技术等，体外、体内实验相结合，以星形胶质细胞足突离子网络异常转运为靶向，动态观察脑出血脑水肿形成过程及安脑平冲方的干预，以期阐明安脑平冲方对脑出血后脑水肿的靶向调控作用。

星形胶质细胞离子转运异常及神经炎症是脑出血脑水肿的重要原因之一。课题组前期研究表明以“冲气上逆-脑玄府通利失调”病机组方的安脑平冲方（ANPCD）对脑出血脑水肿有确切疗效，机制可能与调节星形胶质细胞足突水通道蛋白相关。深入研究安脑平冲方干预脑出血脑水肿的药理、分子机制，对提高临床疗效，拓展研究领域具有重要意义。. 本课题首先利用UPLC-Q-TOF法鉴定ANPCD的药效物质成分；接着检测ANPCD含药血清对凝血酶干预星型胶质细胞离子通道、皮质神经元神经营养因子表达的影响；并利用病理学、分子生物学技术检测脑出血大鼠模型各时间点脑水肿、自噬等表型的动态变化及ANPCD的干预作用；最后，聚焦于胶质细胞的炎症极化，揭示ANPCD通过 PPARγ信号通路调节胶质细胞极化改善大鼠脑出血后神经炎症，进而改善脑出血脑水肿的作用。. 结果表明，药效物质学分析显示，ANPCD浸膏中快速准确鉴别出有效化学成分 79个，主要为生物碱类、糖苷类、黄酮类、酚酸类等。其中来源于钩藤；ANPCD可有效提升凝血酶干预星型胶质细胞的增殖率，降低离子通道蛋白TRPV4、Kca3.1蛋白表达量，降低星形胶质细胞上清的TNF-α含量；ANPCD可有效降低血红蛋白损伤皮质神经元亚铁离子、RPS表达，并升高神经营养因子BDNF、Nrf2蛋白表达；进一步基于时间序列的实验证明ANPCD可有效改善神经功能缺损评分，减轻脑组织病理损伤，降低脑组织凋亡率，并可促进BDNF、TrkB蛋白的表达，抑制Bax，促进Bcl2蛋白表达；ANPC改善脑出血脑水肿机制与升高PPARγ、Arg-1、IL-4蛋白，降低脑出血模型血清中IL-1β、TNF-α含量，减轻神经、胶质细胞炎症反应相关。. 本课题以星形胶质细胞足突离子网络异常转运、PPARγ介导的神经炎症为靶向，动态观察脑出血脑水肿形成过程及安脑平冲方的干预，以期阐明安脑平冲方对脑出血后脑水肿的靶向调控作用，为出血性脑中风的防治提供新的思路与靶点，对促进“平冲降逆法”治疗出血性脑中风的临床应用和物质基础研究具有重要意义。