X-连锁显性遗传的腓骨肌萎缩症Connexin32基因突变病理功能研究

腓骨肌萎缩症（CMT）是人类最常见的遗传性周围神经病，晚期致残率高。本课题组发现2个CMTX1家系connexin32（Cx32）基因点突变G62A和T266C。本研究在构建野生型pEASY-T/WT 和突变型pEASY-T/Cx32（G62A）及pEASY-T/Cx32（T266C）质粒的基础上，应用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术，建立稳定转染Cx32WT和Cx32MT（G62A，T266C）的HeLa 细胞和瞬时转染的胚胎鼠雪旺氏细胞两种细胞模型；通过显微注射技术观察野生型和突变体细胞间隙不同分子量的荧光染料通透性变化；通过膜片钳技术检测野生型和突变体细胞间的电导和电流的变化。本课题旨在阐明Cx32突变基因（G21D、L89P）在CMTX1发病过程中的病理功能，并为进一步的在体研究和找到治疗本病的有效方法提供一定的理论依据

（CMT）是人类最常见的遗传性周围神经病，晚期致残率高。本课题组发现2个CMTX1家系connexin32（Cx32）基因点突变G62A和T266C。本研究应用PCR定点突变方法构建构建了野生型pEASY-T/WT 和突变型pEASY-T/Cx32（G62A）及pEASY-T/Cx32（T266C）质粒，利用基因重组技术构建了野生型及突变型Cx32 与绿色荧光蛋白（EGFP ）的共表达载体；利用脂质体将上述的共表达载体转染至communication-incompetent HeLa 细胞和人的雪旺氏细胞，建立了瞬时转染的Cx32WT和Cx32MT（G62A，T266C）的HeLa 细胞和人雪旺氏细胞两种细胞模型。同时设空载体转染对照组；应用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术对突变体进行了定位。研究发现L89P（T266C）突变体全部滞留于内质网内，而G21D（G62A）突变体主要滞留于高尔基体。这一结果与我们原来的推测G21D突变体可能被阻滞于内质网，而L89P突变体Cx32蛋白可能滞留于高尔基中有相吻合之处，即二者都未能到达细胞膜形成功能性通道；也有不相吻合之处，即两个突变体虽然都滞留在细胞内，但滞留的位置与推测相反。本研究进一步提示突变的形式更重要；也同时拓展了对CMTX突变体功能研究的数量，为进一步的在体研究和找到治疗本病的有效方法提供一定的理论依据。