桂枝、荆芥挥发油抗病毒效应的 TLR/IFN信号机制研究

本研究在中医药理论指导下，基于表证与病毒感染密切相关，解表药桂枝、荆芥具有抗病毒效应等基本事实，围绕桂枝、荆芥挥发油的抗病毒目标效应，选择病毒免疫应答为切入点，采用体外与体内实验相结合研究模式，运用流式细胞检测、荧光定量PCR、Western blot等方法技术，以TLR3/7/8介导I型干扰素产生信号途径的若干关键靶分子为评价指标，深入研究桂枝、荆芥挥发油及主要成份桂皮醛、薄荷酮的抗病毒作用及其免疫应答分子信号机制，为解表药治疗表证的临床应用及阐释其"辛散解表"性效的现代内涵提供科学实验依据。

本课题在中医药理论指导下，基于表证与病毒感染密切相关，解表药桂枝、荆芥具有抗病毒效应等基本事实，围绕抗病毒目标效应，以抗病毒免疫应答为切入点，采用体外与体内实验相结合研究模式，以TLR3/7介导I型干扰素产生信号途径的若干关键靶分子为评价指标，深入研究桂枝、荆芥挥发油及主要成份桂皮醛、胡薄荷酮等的抗病毒作用及其免疫应答分子信号机制。. 研究结果显示：①荆芥挥发油（VOST）和胡薄荷酮、桂枝挥发油（VORC）及桂皮醛抑制甲型流感病毒（H1N1）在MDCK细胞内的增殖；薄荷酮则几乎无抑制作用，且对流感病毒亦具有明显的直接杀灭作用。荆芥、桂枝挥发油含药血清亦能显著抑制流感病毒在MDCK细胞中的增殖和一定直接杀灭作用。②VOST及胡薄荷酮、VORC及桂皮醛在鸡胚内有较好的抗流感病毒作用，降低尿囊液血凝滴度，且以卵黄囊途径给药效果为优，薄荷酮抗病毒效应不明显。③VOST及薄荷酮、胡薄荷酮，VORC及桂皮醛预防及治疗方式给药能明显提高病毒感染小鼠的死亡保护率；治疗方式给药能降低肺指数、肺组织病毒滴度，并能改善肺组织炎症病变程度。④VOST 0.1mg/ml提高染毒MDCK细胞内TLR7、IRAK4、TRAF3 和IFN-β mRNA表达水平；胡薄荷酮0.1mg/ml、VORC和桂皮醛（均0.25×10-5ml/ml）能显著提高TLR7 、IFN-β和IRAK4 mRNA表达水平；荆芥、桂枝挥发油含药血清（5%）显著提高染毒细胞TLR7、IFN-β mRNA相对表达量；薄荷酮0.25mg/ml提高TLR7和IRAK4 mRNA表达水平，但降低TLR3 mRNA表达水平；VOST、胡薄荷酮、VORC和桂皮醛、荆芥、枝挥发油含药血清（5%）亦显著提高染毒细胞上清液中IFN-β水平。⑤治疗方式给药，VOST、胡薄荷酮、VORC明显增加模型小鼠肺组织TLR7 mRNA表达；VOST、桂皮醛能显著降低TRAF6 mRNA表达，对小鼠肺组织Myd88 mRNA表达有降低趋势。各药物组对病毒感染模型小鼠T细胞亚群CD4+/ CD8+比值的低下有对抗作用。⑥治疗方式给药，VOST与VORC明显降低病毒感染小鼠血清TNF-α含量，提高IFN-α水平；薄荷酮、桂皮醛明显增高病毒感染小鼠血清IFN-β含量，薄荷酮还降低IL-6含量；胡薄荷酮降低毒感染小鼠血清IL-6、TNF-α含量。