表达GM-CSF和IL-12的1型单纯疱疹病毒载体系统的研究

HSV-1作为溶瘤病毒和疫苗载体已有广泛的基础和临床研究。申请者前期已获得缺失内部反向重复序列的重组HSV-1，其保留了感染哺乳动物细胞的能力，并能表达携载的报告基因。项目拟在此基础上开展以下研究：1、利用细菌人工染色体技术将HSV-1中抑制MHC-1递呈抗原的ICP47删除，插入促进树突状细胞发育和抗原递呈的细胞因子GM-CSF和IL-12，并恢复tk基因，获得复制型HSV-1载体；2、在体外培养细胞中研究HSV-1载体的增殖特性、细胞毒性、溶瘤特性及对疱疹病毒药物安昔洛维的敏感性；3、在小鼠体内研究HSV-1载体的感染特性、生物安全性、组织靶向性及其对小鼠免疫系统的影响；4、以荷瘤小鼠为模型研究HSV-1载体对实体瘤的抑杀作用。研究旨在获得能激活机体免疫系统的、安全的大容量复制型HSV-1载体，为溶瘤病毒和病毒载体疫苗研究提供新的体系。

HSV-1作为溶瘤病毒和疫苗载体已有广泛的基础和临床研究。本项目在前期获得缺失内部反向重复序列（IR）的重组HSV-1的基础上，利用细菌人工染色体技术将HSV-1中抑制MHC-1递呈抗原的ICP47删除，并分别将IL-12和p53基因重组入HSV-1，获得了复制型HSV-1载体；继而在体外培养细胞和小鼠体内研究了HSV-1载体的增殖特性、细胞毒性及溶瘤特性。结果表明，删除IR区和ICP47基因的重组HSV-1保留了复制能力，能够携载并表达外源基因，可开发为溶瘤病毒载体。删除IR区和ICP47基因的重组HSV-1以及携带p53和IL-12基因的重组病毒在神经母细胞瘤细胞中的增殖能力高于在其他肿瘤细胞中的增殖能力，并可裂解肿瘤细胞。上述重组病毒能够抑制小鼠B16皮下移植瘤的生长，且携带p53基因的重组病毒能够延长荷瘤小鼠的生存时间。