lncRNA FOXD1-AS1调控替莫唑胺耐药的机制及临床研究

It was reported that lncRNA plays an important role in many life activities such as: epigenetic regulation, cell proliferation, cell cycle differentiation, drug resistance and so on. Our previous studies found that lncRNA FOXD1-AS1 was related to temozolomide resistance, and it could regulate the expression of DSB partway protein. Therefore, we hypothesized that lncRNA FOXD1-AS1 could causes temozolomide resistance by regulating DSB HR pathway activity which binding to some proteins of HR pathway. In current study, dual-luciferase reporter and MTS assay will be firstly used to determine the role of DSB HR pathway in lncRNA FOXD1-AS1 mediated temozolomide resistance. Thus, Chirp-MS and RIP will be used to identify the protein and effect of the DSB HR pathway combined with lncRNA FOXD1-AS1. Finally, clinical significance of this study will be explored in glioma patients. This study will provide a new mechanism for the occurrence of temozolomide resistance and a new biomark.

研究表明，lncRNA在表观遗传调控，细胞增殖和周期分化，药物耐药等中扮演着重要的功能角色。前期我们发现lncRNA FOXD1-AS1与替莫唑胺的化疗敏感耐药相关，且能调控DSB HR通路部分蛋白的表达。由此推测lncRNA FOXD1-AS1可能通过结合DSB HR途径中的某些重要蛋白并发生了蛋白翻译后修饰，继而调控DSB HR通路的活性，最终介导替莫唑胺的耐药作用。本研究首先利用双荧光素酶报告基因和MTS法明确lncRNA FOXD1-AS1通过DSB HR途径介导替莫唑胺的耐药作用；进一步使用Chirp-MS和RIP等方法确定与lncRNA FOXD1-AS1结合的靶蛋白和结合后所产生的蛋白翻译后修饰；最后在胶质瘤患者中验证FOXD1-AS1及DSB HR通路与替莫唑胺耐药的相关性。本课题将为替莫唑胺耐药的发生提供新的阐释及为其化疗疗效预测提供新的生物标志物。

lncRNA在表观遗传调控，细胞增殖和周期分化，药物耐药等中扮演着重要的功能角色。通过本研究，我们发现影响胶质瘤进展及替莫唑胺耐药的重要分子：lncRNA FOXD1-AS1。研究发现，lncRNA FOXD1-AS1在胶质瘤细胞中充当一个癌基因的角色，即沉默FOXD1-AS1会显著抑制脑胶质瘤细胞体外增殖、克隆形成以及细胞的迁移能力，同时也抑制胶质瘤细胞在动物体内的增殖能力，而过表达FOXD1-AS1，则相反。进一步研究还发现FOXD1-AS1能与miR339-5p及miR342-3p发生基因序列上的结合，并受到miR339-5p及miR342-3p的调控，质谱（MS）实验证明eIF5a可能是 FOXD1-AS1 的靶蛋白，从而调控肿瘤的发生进展。此外，lncRNA FOXD1-AS1能调控DSB HR通路部分蛋白的表达（MGMT/γh2AX），继而调控DSB HR通路的活性，最终介导替莫唑胺的耐药作用。本课题可能为胶质瘤的发生发展及替莫唑胺耐药的发生提供新的阐释和新生物标志物。