神经性耳聋治疗新模式：载神经营养因子类脂立方晶内耳给药系统的研究

神经性耳聋的治疗是世界难题之一，临床常用的全身或内耳给药存在血-迷路屏障或药物易流失的问题，影响治疗效果。本课题在国际上首次提出将结构和性质独特的类脂立方晶（由类脂成分组成的双连续反相立方液晶体系）应用于内耳给药，选用在神经性耳聋治疗上具有明确治疗意义的脑源性神经营养因子和神经营养素-3为治疗分子，借助类脂立方晶良好的蛋白药物容纳性、稳定性、生物粘附性及较强的生物膜透过性，提高药物经圆窗膜的渗透量，将神经营养因子运送至作用靶点。课题首先构建类脂立方晶载体系统，对其结构和性质进行研究，着重考察神经营养因子经鼓室内注射至圆窗膜后，药物在耳蜗内的分布和制剂对耳蜗结构和功能的影响。建立动物耳聋模型进行药效学研究，优化给药剂量、频率和给药方式，为神经营养因子治疗神经性耳聋的实际临床应用提供实验支持和理论依据。前期工作表明本课题可行性良好。

神经营养的支持对内耳中螺旋神经的存活起关键作用。神经生长因子（NGF）是神经营养素家族的重要成员，被广泛应用与神经系统的疾病治疗中。根据其跨圆窗膜能力较差和易失活的特点，利用纳米技术将其载入类脂立方晶，旨在提高药物的内耳传递。.采用稀释法，以甘油单油酸酯、植烷三醇为脂质材料，Plunoic® F127 或酪蛋白为稳定剂，制备了粒径约为150 -220nm 的立方晶。通过加入不同浓度的荷正、负电荷的脂质修饰立方晶，未经修饰的和表面修饰的立方晶结构经同步小角光散射法和冷冻刻蚀电镜法确证。.采用共聚焦显微镜及流式细胞仪法对荷不同电荷的空白纳米载体在L929细胞内的摄取进行定性定量检测，发现带有表面荷正电荷的立方晶更容易通过细胞膜；考察了细胞实验优选出的载体在离体豚鼠模型中经圆窗膜给药后在耳蜗中的分布，结果显示荷正电的立方晶更容易跨越圆窗膜，且在耳蜗的顶回中发现了的荷正电的立方晶。.将NGF载入立方晶后，采用共聚焦显微镜的方法定性考察不同载体对其细胞摄取的影响（L929），结果显示载入单油酸甘油酯立方晶的NGF的细胞摄取均明显高于游离药物，且载入DOTAP修饰的立方晶的药物的细胞摄取高于未经表面电荷修饰的实验组，但将药物载入植烷三醇后，NGF的细胞摄取未见增加。.采用NGF诱导P12细胞分化的方法考察纳米制剂中药物的活性。结果是NGF在制成纳米制剂后，NGF的活性都有所增加，特别是DOTAP修饰的和酪蛋白稳定的立方晶组。.体外释放结果表明，酪蛋白稳定的立方晶能够控制NGF的释放；豚鼠体内圆窗膜给药后，发现植烷三醇组合酪蛋白稳定组能够显著增加NGF在耳蜗液中的生物利用度，这可能是因为这两组制剂能够提高药物的经圆窗膜的渗透性且能够较好的保持蛋白活性的缘故。