从茵栀黄方提取物-含药血清-细胞摄入物中筛选退黄药效物质

Hyperbilirubinemia is one of the common indoor diseases in neonatal.Howerver, the safe and effective therapeutic drugs are lacking. Yinzhihuang precsription has a good therapeutic effect in clinic. Therefore, it is very necessary to screen the effective substituents from Yinzhihuang prescription. Our research group has conducted the research to the mechanism and the regularity of compatibility of Yinzhihuang prescription, and the results show that regulating the expression of liver cell membrane transport protein is a pathway reducing bilirubin level in serum. Based on the previous research, hyperbilirubinemia HepaRG cell will be used for investigating the effect of herbal extracts of Yinzhihuang and serum obtained from herbal extracts adninistration to rat; the chemical composition of herbal extracts of Yinzhihuang, serum containing drugs and chemical composition uptaken by cell will be analyzed by UPLC-ms2; the quantitative compositions-activity relationship will be built by using chemometrics algorithm, and the active substance will be selected by this way; then, the active substance will be separated, identified from the related origins; finally, the pharmacological activity of these active substance will be verificated using hyperbilirubinemia HepaRG cell models. After the project finished, it is expected to find new drugs or leading compounds for treating hyperbilirubinemia.

高胆红素血症为新生儿常见室内收治疾病之一，其安全有效的治疗药物非常缺乏，茵栀黄方在临床治疗中获得了良好的治疗效果，因而对茵栀黄方中治疗高胆红素血症的药效物质进行研究非常必要。课题组前期对茵栀黄方的作用机制和配伍规律进行了研究，结果表明茵栀黄方通过调节肝细胞膜转运蛋白的表达来实现对血清中胆红素水平的调控。在前期研究的基础上，本项目拟采用HepaRG高胆红素细胞模型对茵栀黄方药材提取物及其含药血清的药效学进行评价；采用UPLC-MS2技术获取药材提取物、含药血清、细胞摄入物的化学组成信息；采用化学计量学中相关算法构建定量组-效关系对茵栀黄方中药效物质进行筛选；采用制备色谱/波谱技术对筛选的药效物质进行分离、鉴定；最后采用细胞模型对候选药效物质药理活性进行验证。通过项目的实施有望发现新的治疗高胆红素血症的药物或先导化合物。

高胆红素血症即黄疸是临床常见疾病之一，新生儿为高发群体，但其安全有效的临床治疗药物较为缺乏。中药经典方剂茵栀黄方在治疗黄疸方面疗效显著，然而有关其治疗高胆红素血症的具体药效物质尚不明确。因此，对茵栀黄方中治疗高胆红素血症的药效物质进行研究非常必要。本项目通过建立稳定的HepaRG高胆红素细胞模型，评价了茵栀黄方提取物及其不同组方与其含药血清的药效学；采用HPLC-MS2技术获取了提取物、含药血清、细胞摄入物的化学组成信息；采用偏最小二乘回归、遗传算法-多元线性回归方法构建了定量组-效关系并成功筛选出茵栀黄方中主要发挥退黄作用的药效物质；采用色谱/质谱信息比对对筛选的物质进行了鉴定；采用高胆红素细胞模型对筛选出的药效物质进行了验证。结果显示：（1）胆红素联合丙磺舒共同干预HepaRG细胞可获得细胞内直接和间接胆红素水平均显著升高的、稳定的高胆红素细胞模型；（2）茵栀黄总方较其他组方在降低模型细胞内胆红素水平方面疗效更为显著且无明显细胞毒性；（3）通过提取物-含药血清-细胞摄取物三个水平的HPLC-MS2谱图对比，初步筛选出7个可能药效物质；（4）化学计量学相关算法建立不同浓度茵栀黄方定量组-效关系，从7种可能药效物质中进一步筛选出3个具有显著治疗高胆红素血症功效的药效物质，其分别为京尼平龙胆双糖苷、异嗪皮啶和汉黄芩素；（5）京尼平龙胆双糖苷、异嗪皮啶和汉黄芩素在其治疗浓度范围内均可显著降低高胆红素细胞模型细胞内的胆红素水平。综上所述，项目通过方剂提取物-含药血清-细胞摄取物三个水平逐层递进的筛选，并结合化学计量学定量组-效关系分析，有效的筛选出茵栀黄方体系中3个具有显著降低胆红素的潜在药效物质，项目的成功实施为茵栀黄方的进一步开发利用及治疗高胆红素血症的新药发现奠定了坚实的基础。