GSK-3及其上下游调节通路在电针抗急性缺血性脑损伤中的作用

Acute ischemic brain injury is a common disease which endangers human health seriously. Acupuncture as a traditional Chinese medicine treatment has benifits to the brain injury. But the mechanism is not clear. Recent research has indicated that δ- opioid receptor play an immportant role in protecting brain cell. Our research focus on whether electroacupuncture will against acute ischemic brain injury via glycogen synthase kinase-3 signal and its pathway by δ-opioid receptor. This application has fully accepted the suggestions from the NSFCP. Experiment will detect how the electroacupuncture work on hemodynamics of rat brain/ functions of the brain/ infarct size of brain by Western blotting, immunohistochemistry, quantitative Polymerase Chain Reaction (PCR). All these different methods will be used to find out that the expression of GSK-3 and related gene signal in Cerebral cortex/ hippocampus/ striatum and the relation between GSK-3 and Apoptosis gene, to discover GSK-3 expression in all these three sites, to detect if electroacupuncture will against acute ischemic brain injury. Our research will provide new evidence in the field of that electroacupuncture against acute ischemic brain injury, it also will perfect the acupuncture treatment and provide new cue in finding new therapeutic target of acute ischemic stroke.

缺血缺氧性脑损伤是严重危害人类健康的常见疾患。中国传统医学的针刺对脑中风有一定疗效，但其机制尚未完全明了。最新研究表明δ-阿片受体（DOR）在脑保护中起重要作用,本项目通过电针对大鼠急性缺血性脑损伤模型的干预研究，探索电针是否籍DOR而激活糖原合成酶激酶-3(GSK-3)信号及其通路中的上下游信号分子，转而对抗急性缺血性脑损伤。本申请已全面接受去年评委的建议，实验将检测电针对大鼠脑血流、神经功能评分、脑梗死体积的影响，用蛋白印迹、免疫组化、定量PCR等不同方法研究大脑皮层、纹状体、海马三个不同脑区内GSK-3及其通路中上下游信号分子的表达与活性及其与凋亡因子的关系，探讨急性缺血性脑损伤时大脑皮层、海马、纹状体内GSK-3活性的异同，及其在电针对抗急性缺血性脑损伤的作用。本项目的完成将对电针抗缺血性脑损伤的分子机制提供全新的实验依据，对完善缺血性脑损伤的针刺治疗和开发新防治靶点提供新线索。

缺血缺氧性脑损伤是严重危害人类健康的常见疾患，从胎儿期的宫内缺氧，到新生儿窒息，以及成年后的缺血性脑中风，给患者及其家属带来巨大痛苦，为国家带来沉重的医疗和社会负担。目前对于缺血缺氧性脑损伤，尤其是中风，仍缺乏有效的防护和治疗措施。其原因之一在于其分子病理机制及相关制约因素尚不明了。.针刺疗法是中国传统医学的重要部分，2000多年来广泛应用于中医临床。唐朝前后即有针刺治疗“卒中”的记录。近代以来，国内外有关文献日益增多。因易于规范性操作、刺激参数重复性较好等特点，电针已在临床上广为采用。然而，电针治疗缺血性脑损伤的影响因素及其机制的科学论证仍不充分，这对于推广电针的应用和改善其疗效是一大障碍。.对于电针治疗中风的研究，很难实行有严格对照(即不加处理或“假电针”的中风病人)的人体实验。因此，进行广泛而深入的实验室研究对阐明电针抗缺血性中风的分子机制具有重要价值。由电针引起的机体变化往往是多层次、多靶点、多方面的，增强脑内多种抗损伤因子的功能可能是电针对抗缺血性脑损伤的重要一环。探索电针作用的信号转导过程和机理一直是电针研究中重点关注的切入点，对明确电针效应产生的机制、推广电针疗法以及提高电针疗效具有非常重要的意义。我们正是在此背景下开展本研究。.2. 项目进展情况及取得成效.通过大鼠试验，从器官、细胞、分子水平，探讨GSK-3上下游调节通路在电针抗急性缺血性脑损伤的作用。.1).用大脑中动脉线栓法致大鼠局部脑缺血并行再灌注制作大鼠模型，并把大鼠随机分为9组：假手术组、 假电针组、电针组、GSK-3β抑制剂组、GSK-3β抑制剂+电针组、DOR抑制剂组、DOR抑制剂+电针组、DOR激动剂组和DOR激动剂+电针组。观察各组的皮层局部脑血流记录，神经功能缺损评分，脑梗死体积检测。.为进一步确定细胞内信号调节通路结果的可靠性，除应用抑制剂外，在部分动物将用RNA干扰技术予以验证。.2).分别取大鼠的大脑皮层、海马、纹状体脑组织，用蛋白印迹法、免疫组织化学法、定量PCR的方法检测三个部位在缺血状态下DOR、AKT、ILK 、GSK-3β、Bcl-2、caspase-3的表达，并检测细胞凋亡。. 通过上述实验观察和检测，围绕急性缺血性脑损伤的脑血流变化、神经功能缺损、脑梗死体积大小，凋亡细胞观察以及GSK-3的上下游物质检测，探讨电针对急性缺血性脑损伤的作用机制中是