99mTc-膜联蛋白V凋亡显像对胰腺炎继发感染的早期检出及疗效评估实验研究

急性胰腺炎继发感染病情变化快、死亡率高，临床亟需能够及时、准确检出感染灶、监测疗效的方法。99mTc-膜联蛋白V凋亡显像可在感染早期（数十分钟至数十小时）与凋亡的中性粒细胞特异结合并显像，有望使SAP继发感染检出的时间由目前方法的1周提前到数十分钟至数十小时，并可及时评估疗效。首先行体外结合试验明确凋亡显像剂可标记于凋亡中性粒白细胞的外膜特异位点；以小型猪SAP继发感染模型为平台，在大肠杆菌接种前及接种后4 h、24 h行99mTc -膜联蛋白V SPECT-CT显像，观察胰腺坏死感染区凋亡增加情况，99mTc-环丙沙星显像和增强CT作为对照；SAP继发感染模型分抗生素治疗组和安慰剂组，在治疗前、治疗后4 h、24 h、48 h行凋亡显像，观察99mTc-膜联蛋白V显像放射性计数变化情况，评价其评估抗生素治疗响应的价值。以病理检测及细菌培养为金标准评价99mTc-膜联蛋白V凋亡显像的价值。

重症急性胰腺炎（SAP）继发感染病情变化快、死亡率高，临床亟需能够及时、准确检出感染灶、监测疗效的方法。本研究设想99mTc-膜联蛋白V（annexin Ⅴ）凋亡显像可在感染早期（数十分钟至数十小时）与凋亡的中性粒细胞特异结合并显像，使SAP继发感染检出的时间由目前的1周提前到数十分钟至数十小时。.课题组在前期完成的国家自然科学基金《重症胰腺炎继发感染的功能成像早期诊断及比较影像学研究》（编号30570535）中，利用99mTc标记环丙沙星能特异的与活性大肠杆菌结合的原理区分无菌性和细菌性炎症，进行SAP继发感染早期诊断及疗效判断，研究表明在SAP继发感染模型制作1周时显像最佳，99mTc标记环丙沙星SPECT功能显像诊断有较高的敏感性和特异性。.本研究首先行体外结合试验明确凋亡显像剂99mTc-HYNIC-annexinⅤ可靶向标记于凋亡的中性粒细胞；在体实验以小型猪SAP继发感染模型为平台，用99mTc标记膜联蛋白V行SPECT/CT凋亡显像，观察是否可以用于对SAP继发感染的诊断，将影像结果与病理对照。 .在体显像实验过程比较曲折：使用99mTc-HYNIC-annexinⅤ行小型猪SAP继发感染模型多时间点（造模后第1、3、4、7日）凋亡显像时，未发现胰腺区放射性浓聚。分析未取得预期结果的可能原因主要有药物质量问题、显像时间点选择不当、大肠杆菌侵袭力弱等，经过更换新一批次annexin V、选择侵袭力强菌株并提高菌液浓度，再次进行猪SAP感染模型的多时间点凋亡显像，但结果仍为阴性。随后，我们通过实施小鼠后肢肌肉感染模型的凋亡显像，成功显像，排除了99mTc-HYNIC-annexinⅤ药物质量问题。课题组讨论分析，考虑到不同物种膜联蛋白V结构上很可能存在差异，市场购买的人膜联蛋白V有可能不能用于小型猪SAP继发感染模型的凋亡显像。我们通过与生物公司合作合成了专门的猪膜联蛋白V，进行了99mTc标记猪膜联蛋白V凋亡显像，在模型猪腹壁手术切口区出现了显著放射性浓聚，显像时间是模型制作后第1天最显著，以后逐渐消退，但在SAP胰腺区域还是未见明确放射性浓聚显影。.目前已发表相关论文11篇（SCI论文4篇）。后续我们将争取在小型猪的腹腔制作感染灶并用99mTc标记猪膜联蛋白V行凋亡显像，成功后，改进SAP继发感染模型、摸索显像时机，争取完成实验设想。