神经介素S对猪生殖调节机制的研究

神经介素S（NMS）是2005年发现的一种神经肽, 含有36个氨基酸, 为FM32/GPR66和FM-4 /TGR1 的内源性配体, 即与神经介素U结合共同的受体(NMU-R)。已有研究表明，NMS参与摄食、生物钟节律、免疫和生殖活动等多种生理功能的调节。但未见对猪的研究报道。本项目拟采用RT-PCR、免疫组化、荧光双标记、放射免疫等方法研究NMS在猪下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴的发育学变化、与GnRH和雌激素受体的形态学关系、向去卵巢猪侧脑室注射NMS对生殖相关基因表达和激素水平的影响、慢性（睾丸内注射）给予NMS对塞托利斯细胞基因、生精上皮细胞的排列及精子生成、成熟和长形精子细胞移动的影响，以及NMS对体外培养的睾丸组织睾酮分泌的影响，从而揭示NMS参与猪生殖活动调节的功能性神经解剖学通路，掌握其时空动态变化并初步探讨其参与生殖活动调节的可能机制，为提高猪的繁殖力奠定基础。

摘要：本研究克隆了猪NMS及其两个受体（NMU1R和NMU2R）的基因，并采用半定量RT-PCR和原位杂交的方法研究NMS和NMU2R mRNA在猪体内的表达,结果显示： NMS及其受体NMU2R广泛的分布于中枢神经系统级外周组织。在母猪发情周期不同阶段下丘脑-垂体-卵巢轴上NMS和NMU2R mRNA呈现规律性表达，表明NMS在母猪发情周期中起着重要调节作用。. 不同剂量NMS对体外培养的猪下丘脑脑片中GnRH、腺垂体细胞中LH、FSH和PRL及卵巢细胞中E2释放的影响。结果发现不同剂量的NMS在HPG轴各级水平发挥作用。给去卵巢母猪侧脑室注射NMS给去卵巢母猪（NMS注射组）和SHU9119预处理的去卵巢母猪（SHU9119+NMS注射组）对血清中 LH水平的影响，结果显示NMS能够显著的抑制血清中LH水平，而且这种抑制作用可被SHU9119阻断，该结果表明NMS调节LH的释放可能是同过MSH介导的。.实时荧光定量 RT-PCR 方法检测侧脑室注射NMS给去卵巢母猪（NMS注射组）和SHU9119预处理的去卵巢母猪（SHU9119+NMS注射组）下丘脑-垂体轴上与生殖相关的GnRH、LH、FSH、NMU2R、PR和ER mRNA表达的影响，结果显示： NMS能够下调下丘脑GnRH mRNA 和垂体中LH mRNA的表达水平，上调下丘脑和垂体NMU2R和PR mRNA 的表达水平，而对下丘脑和垂体中ER mRNA的表达无显著影响。. 对于公猪，研究了出生后不同日龄小梅山公猪生殖轴中NMS及其受体的发育学变化。结果显示，NMS及NMUR-2R mRNA在生后小梅山公猪下丘脑、垂体、睾丸中都有表达，且呈现波动性变化。分离培养睾丸间质细胞，10-6、10-8、10-10或10-12 M NMS进行处理研究NMS对睾酮分泌的影响，结果显示10-8M的NMS显著性（p<0.05）促进睾丸间质细胞睾酮的分泌。向2月龄小梅山公猪睾丸内注射不同剂量NMS对下丘脑、垂体和睾丸生殖相关激素和基因的影响及对睾丸组织发育的影响，结果显示0.4及2 µg/kg剂量组能极显著的促进STAR 和显著促进3β-HSD mRNA的表达，0.08，0.4µg/kg剂量组分别能显著和极显著的促进P450 mRNA的表达。组织学结果显示连续慢性睾丸内注射NMS对睾丸组织的发育有显著的调节作用