新型色谱固定相的合成及应用

研究包涵体蛋白分离、纯化与复性的方法对于重组蛋白药物的发展具有重大的实际意义。液相色谱法是一种有效而理想的蛋白分离纯化与复性的方法，疏水色谱作为最常用的色谱复性方法也存在局限性。本项目拟以修饰过的壳聚糖为交联骨架，采用液氮极冷凝胶化法，在形成微球骨架的同时将N-异丙基丙烯酰胺（PNIPAAm）作为功能化的聚合物同步结合至微球的表面和微孔表面上，合成对环境温度和pH等具有响应的多孔微球，并探讨该多孔微球作为新型色谱固定相对蛋白分离纯化与复性的影响。这种多功型色谱填料，可以允许纯水或很低浓度的盐溶液做流动相，具有较高的吸附载量和回收率，有望较好地解决传统疏水色谱中存在的主要问题。本项目是一项具有潜在应用价值的基础研究，研究结果将为该类色谱填料的工业化生产提供理论依据。

研究包涵体蛋白分离、纯化与复性的方法对于重组蛋白药物的发展具有重要意义。液相色谱法是一种有效而理想的蛋白分离纯化与复性的方法。本项目围绕新型色谱固定相的制备及应用进行研究，以壳聚糖、葡聚糖、琼脂糖三类多糖为基质，成功合成2种色谱固定相，应用于标准蛋白、实际样品的分离；合成了2种用于酶切的毛细管酶反应器和1种用于多肽分离的毛细管开管柱。主要包括：(1) 在以多糖为基质的色谱填料研究中，以葡聚糖为基质，采用液氮极冷法制备可用于蛋白分离的凝胶微球；对琼脂糖微球进行改性，制备了温度感应的色谱固定相；开发了一种高浓度的琼脂糖凝胶微球，可用于多酚小分子的一步分离纯化及蛋白质的凝胶过滤和脱盐，并初步探讨分离机理；(2) 以毛细管为载体，制备了一系列在毛细管内壁键合功能端基的固定化酶反应器，极大的提高了蛋白质酶切效率；制备的反相毛细管开管柱对多肽具有良好的分离效果；(3) 运用色谱技术，对MMP-13和Tum-5的包涵体的分离、纯化及复性进行研究，并对MMPS的抑制机理进行了初步探讨。上述研究成果为多糖类色谱固定相和毛细管色谱柱的开发，以及在蛋白质纯化复性、多酚小分子的分离纯化研究中具有重要意义。