荧光VEGF165单抗标记磁性纳米粒MR对比剂对肿瘤靶向显像和治疗的实验研究

肿瘤细胞在生长过程中合成大量血管内皮生长因子-165（VEGF165），它是肿瘤生长的关键因子。所以，以VEGF165为靶点开发靶向性活体显像与治疗是当前研究热点。我们前期实验对VEGF165_适配体标记超顺磁性氧化铁（SPIO）的靶向性进行了体内外实验，发现其能以肿瘤区VEGF165为靶点磁共振（MR）靶向成像，提示可以VEGF165为靶分子进行肿瘤靶向显像与治疗。.本研究进一步采用荧光VEGF165单克隆抗体标记超微超顺磁性氧化铁（USPIO），构建靶向MR阴性对比剂并同时观察其靶向治疗能力。先行体外实验后，导入荷瘤动物模型体内，通过动物荧光成像系统观察本探针在体内分布与消除过程；经过MR扫描探讨其对肿瘤成像特性，为新型MR对比剂的设计及其临床应用奠定实验基础。并进一步开拓性采用交变磁场对接受探针荷瘤鼠实行热疗，观察本探针肿瘤靶向磁热疗疗效，为未来临床交变磁场加热治疗肿瘤奠定实验基础。

研究背景与目的：本研究拟采用荧光VEGF165单克隆抗体标记超微超顺磁性氧化铁（USPIO），构建靶向MR阴性对比剂,并同时观察其靶向治疗能力。但在实验中发现抗体颗粒太大，无法通过机体的网状内皮系统，故改用荧光NGR小肽钆，靶向肝癌的CD13分子。主要研究内容：①荧光VEGF165单克隆抗体标记超微超顺磁性氧化铁（USPIO）部分：先行体外ELISA实验后，导入荷瘤动物模型体内，通过动物荧光成像系统观察本探针在体内分布与消除过程；经过MR扫描探讨其对肿瘤成像特性。②荧光NGR小肽钆部分：自制FITC-NGR-Gd对比剂，并进行体内、外对HEPG2细胞靶向实验。重要结果与关键数据：①荧光VEGF165单克隆抗体标记超微超顺磁性氧化铁（USPIO）部分：体外ELISA实验表明cy5.5-anti_VEGF165-USPIO对肿瘤VEGF165受体有很好的靶向性，但由于抗体免疫源性及对比剂粒径偏大，约450nm，反复活体荧光及MRI实验未获得肿瘤区明显靶向效果，铁剂均沉积于荷瘤鼠的肝脏和脾脏，导致肿瘤靶向磁热疗疗效部分也无法开展。②荧光NGR小肽钆部分：FITC-NGR-Gd分子生物学和细胞学实验均显示可以靶向CD13高表达的肝癌HEPG2细胞，体内荷瘤鼠实验可使肿瘤显影，但强化效果尚不理想，有待进一步研究。科学意义： 抗体的分子量和颗粒粒径太大，不适合作为MR靶向对比剂的运载体。NGR-Gd粒径很小，没有免疫源性，体内外可以使肝癌HEPG2细胞表面氨肽酶靶向成像，有进一步研究的价值。