以微小RNA-21为靶点的心室重构分子显像实验研究

心室重构是心力衰竭发生的主要病理生理基础。微小RNA-21（miR-21）的表达可介导心肌间质纤维化和心室重构，是导致心力衰竭的一个关键因素，也被认为是治疗心力衰竭的一个重要靶点，实时检测miR-21表达水平具有重要的临床意义。目前miRNA的检测方法主要为荧光定量PCR和Northern杂交等，均不能在活体内动态分析miRNA水平。报告基因荧光显像方法繁琐，应用前景不大。本项目拟合成放射性核素标记锁核苷酸分子探针99mTc-LNA-antimiR-21，并表达血管紧张素Ⅱ-鱼精蛋白融合蛋白，利用融合蛋白包裹分子探针，通过血管紧张素Ⅱ受体实现分子探针的靶向输送，从而建立活体检测miR-21表达水平的分子显像方法。在细胞学实验基础上，利用实验犬急性心梗后心室重构模型，进行活体SPECT显像，并以荧光定量PCR和病理检查进行对比验证。

心室重构是心力衰竭发生的主要病理生理基础。微小RNA-21（miR-21）的表达可介导心肌间质纤维化和心室重构，是导致心力衰竭的一个关键因素，也被认为是治疗心力衰竭的一个重要靶点，实时检测miR-21表达水平具有重要的临床意义。本项目利用联肼尼克酰胺（HYNIC）作为螯合剂成功合成了放射性核素标记锁核苷酸分子探针99mTc-HYNIC-LNA-antimiR-21，标记率>90%；并表达血管紧张素Ⅱ-鱼精蛋白融合蛋白，利用融合蛋白包裹分子探针，通过血管紧张素Ⅱ受体实现分子探针的靶向输送。该分子探针在小鼠体内的生物学分布实验表明：在心、肺、胃、肠内分布相对较低，在肝、肾内有较长时间的聚集，表明主要经肝、肾途经排泄。利用小型猪急性心梗后心室重构模型，进行活体SPECT显像，注射后心梗部位可见局部放射性摄取，注射后1h和2h，T/B（心/肺）比值分别为1.50±0.23和1.93±0.32，而对照组（n=3）分别为1.01±0.11和1.07±0.15，两者均有显著性差异（均为P<0.05）。体外组织检测证实：心梗后心肌纤维化部位，miR-21表达明显增高，从而证实了本项目以miR-21为靶点的心室重构放射性核素分子显像是完全可行的。