CD32聚合FcεRⅠ抑制IgE介导的信号转导及机制研究

既往阻止过敏反应的"封阻和拮抗"或"免疫平衡调节"手段，机制上并未在IgE介导信号的途径上起根本的抑制作用。拟针对IgE介导的信号转导途径"起点站"，探讨"抑制性受体手段"对过敏反应的抑制效应。本研究利用多价过敏原和相应的IgE及IgG使CD32与FcεRⅠ在人肥大细胞表面聚集，通过检测组胺和TNF-α等分析肥大细胞活化情况，判断两个受体交联对过敏反应的抑制效应。为了既摒弃对特异性IgE和IgG的依赖，又可使CD32和FcεRⅠ聚集产生抑制信号，制备针对FcεRⅠ和CD32的核酸适配子，利用适配子使两种受体在膜表面聚集。利用上步实验体系判断适配子对过敏反应的抑制效应；通过IgE竞争结合实验、测定信号蛋白Syk和磷脂酰肌醇磷酸酶SHIP等，分析适配子对IgE介导信号的抑制效应和机制。本研究将有助于明确CD32对FcεR1受体介导信号的负调控效应和作用机制，为适配子应用于过敏治疗提供实验依据。

以Ficoll密度梯度离心分离细胞。用活性抗体标记的免疫磁珠进行MACS 分选,用激光共聚焦方法鉴定嗜碱粒细胞活性。探讨磁珠分选法(MACS) 负性筛选方法获得高纯度嗜碱粒细胞用于速发型过敏反应的研究。Ficoll密度离心后,获得嗜碱粒细胞的纯度为(12. 6 ±3. 87) % ,MACS 纯化后,其纯度可提高到(95. 6 ±3. 96) % ,细胞活性为(98. 6 % ±0. 83) %。激光共聚焦证实,纯化后的嗜碱粒细胞活化后CD63 表达增强,细胞功能完整。用MACS 负性筛选方法可获得高纯度的嗜碱粒细胞,细胞功能完整,可用于速发型过敏反应的研究。以CRTH22FITC、CD203c PE 和CD3Per2CP 3 种抗体标记白细胞,建立嗜碱粒细胞活化试验,用流式细胞仪测定细胞活化及荧光强度。观察慢性荨麻疹血清对嗜碱粒细胞CD203c表达的影响,以建立流式细胞术检测慢性荨麻疹血清中自身抗体的方法。自身血清皮肤试验(ASST) 阳性组CD203c 阳性细胞的百分率为91. 24 ±6. 22 ,与ASST 阴性组(3.33 ±1. 24) 及健康对照组(3. 05 ±1. 07) 比较具有明显差异( P < 0. 01) ;ASST 阴性组与健康对照组比较无显著差异。ASST 阳性组CD203c 平均荧光强度(MFI) 为58. 2 ±12. 55 ,显著高于ASST 阴性组(3. 70 ±1. 32 , P < 0. 01) 和健康对照组(3. 20 ±1. 29 , P <0. 01) ,ASST 阴性组与健康对照组的MFI 比较无显著差异。用CRTH2-FITC、CD203c-PE 和CD3Per-CP 3 种抗体,可以观察嗜碱粒细胞表面的CD203c 表达程度,以判断荨麻疹血清对嗜碱粒细胞的活化。针对LAD2细胞和嗜碱粒细胞由受体聚集导致的活化，建立特异结合肥大细胞膜受体的适配子。所获得的Y1寡聚核苷酸序列对肥大细胞表达CD203c的抑制效果为佳，达67.56 ±12. 68%。说明采用针对肥大细胞膜受体的适配子Y1可以特异性结合肥大细胞膜，并抑制肥大细胞的活化。发表论文6篇，其中SCI论者1篇。