miR205启动子甲基化与Barrett食管癌变的相关性研究

Barrett食管(BE) 是公认的食管腺癌的癌前状态,发生食管腺癌的危险性是普通人群的30～125 倍。miRNAs可通过类似癌基因、抑癌基因或其他方式调控肿瘤的发生、发展和转归过程，研究表明，miRNAs与Barrett食管癌变机制及其预后密切相关。但目前关于Barrett食管癌变的具体机制尚不清楚，且缺乏有效的分子生物学标志物来早期监测这一发生发展过程。本项目基于既往研究结果 ，推测miRNAs甲基化是导致Barrett食管癌变的重要机制。本项目研究miR205在Barrett食管、食管癌中的表达情况，并对其甲基化状态进行检测，探讨miR205甲基化与Barrett食管癌变的相关性。本研究结果将为人们深刻认识Barrett食管癌变的机制提供新的依据，为临床预测Barrett食管早期癌变提供有价值的分子生物学标志，为预防和治疗Barrett食管癌变提供新的治疗靶点。

Barrett食管(BE)是指发生在食管下段的柱状上皮化生取代原有的复层鳞状上皮的一种病理现象，可伴有或不伴有肠上皮化生，被认为是食管腺癌（EAC）的癌前病变，BE患者癌变的风险是非BE患者的30倍以上。研究表明，miRNAs与Barrett食管癌变机制及预后密切相关，但国内外对BE癌变机制的认识尚不完全明确。本研究以表观遗传学为依据，检测miR205、miR203、miR193b在不同细胞系、Barrett食管、食管癌患者中的表达情况和其启动子甲基化状态，探讨BE癌变与miRNA启动子甲基化之间的关系。结果表明BE和食管癌细胞经去甲基化处理前约72小时生长增殖可铺满25ml培养瓶瓶底，计数约5*106，经处理后细胞生长增殖受抑制，120小时后生长范围占瓶底约70%~80%，计数约3-4*106。通过荧光定量PCR方法对所有样本miR205、miR203、miR193b表达量进行检测，结果显示所有BE及食管癌细胞样本miR205、miR203、miR193b表达量均低于正常食管粘膜细胞。给予去甲基化药物处理后，除BE细胞株B-T9外，BE细胞株B-T、B-T10及食管癌细胞株EC109、TE-10、SEG-1的miR205、miR203、miR193b表达量较之前明显升高,食管癌细胞系中miR205、miR203、miR193b表达水平较BE细胞系升高幅度更大。去甲基化处理前，正常食管粘膜细胞株（NES）启动子呈非甲基化，BE和食管癌细胞株启动子呈甲基化或高甲基化，使用去甲基化药物处理miR205、miR203、miR193b表达降低或缺失的细胞后，MSP检测到相应的启动子呈低甲基化或非甲基化。采用免疫组化方法对所取Barrett食管和食管癌及病变旁正常组织进行K-RAS蛋白表达程度的检测，发现K-RAS蛋白在Barrett食管和食管癌组织中的表达均较相对应正常组织中的表达更明显。应用image J软件对其表达量进行半定量分析，发现K-RAS蛋白在Barrett食管和食管癌与相应病变旁正常组织中的表达程度差异具有统计学意义。本研究为miRNAs与Barrett食管癌变有关提供了一定的实验依据，并可能为预防及治疗Barrett食管癌变提供新的靶点。