基于活性追踪和代谢组学的蒙古扁桃抗肺纤维化的药效物质基础和作用机制研究

Treating different diseases with same method have profound theoretical origins as an important content of TCM syndrome differentiation and treatment system. Organ fibrosis is a common pathological features of a variety of chronic diseases. Organ failure caused by organ fibrosis is the main reason of disability and death in patients. At present, the pathogenesis of organ fibrosis is still not clear, has not yet found for the early diagnosis of biomarkers, almost no specific treatment for fibrosis of the drug. Preliminary results showed that Amygdalus mongolica had a preventive effect on prevention and treatment of liver and pulmonary fibrosis. This project is based on the material basis and mechanism of anti liver fibrosis of Amygdalus mongolica in emergency management project , through the establishment of stable ratpulmonary fibrosis model, Combined with histology, fibrosis, physiological and biochemical and other pharmacodynamic indicators to obtain biomarkers, to explore its changes in the process of disease development, the establishment of pulmonary fibrosis diagnosis and prognosis prediction model, to be Amygdalus mongolica intervention to anti-fiber Chemical activity-oriented, comprehensive utilization of a variety of modern chromatography and spectral techniques, metabonomics, molecular biology and other methods, From different levels a whole, organs, cells, proteins, molecules, etc. To explore the basis and mechanism of the pharmacological substance of Amygdalus mongolica and pulmonary fibrosis, and to provide scientific basis for finding effective medicine for treating multiple organ fibrosis, tapping anti-fibrosis and TCM theory of treating different diseases with same method.

异病同治和同病异治是中医辨证论治体系的重要内容。脏器纤维化是多种慢性疾病发展的共同病理特征，由此导致的脏器功能衰竭是患者致残、引发肿瘤、乃至死亡的主要原因。目前脏器纤维化的发病机制仍不十分清晰，尚未找到早期诊断的生物标志物，鲜有专门针对纤维化的治疗药物。本项目结合前期已证实蒙古扁桃具有较好防治肝、肺纤维化作用的结果，在应急管理项目研究的基础上，拟通过建立稳定的大鼠肺纤维化模型，结合组织学、药效学、生理生化等指标，运用代谢组学方法，寻找能够准确反映肺纤维化病程发展的生物标志物，建立肺纤维化诊断和预后预测模型，予以蒙古扁桃干预，以活性追踪为导向，基于多种现代色谱和波谱技术、代谢组学、分子生物学等方法，从整体、器官、组织、细胞、蛋白、分子等多水平系统地探讨蒙古扁桃抗肺纤维化的药效物质基础和作用机制，为挖掘抗多器官纤维化有效药物提供科学依据和临床应用基础，为中医异病同治、同病异治理论提供实验据。

本项目以博来霉素诱导的大鼠肺纤维化(PF)模型，予以蒙古扁桃(AM)干预，通过对其纤维化指标、组织形态学、氧化应激、血清和组织生化指标及分子生物学等指标的测定和分析，筛选AM抗PF的有效部位及剂量，以活性追踪为导向，基于多种现代色谱和波谱技术、代谢组学、分子生物学等方法，探讨AM抗PF的作用机制和药效物质基础。研究表明,1) AM总提物1.5g/kg、3g/kg对博来霉素致大鼠PF具有保护作用。2)筛选出石油醚部位(PET)和正丁醇部位(BUT)为抗PF活性部位。3)PET(0.75、1.25、1.75g/kg)和BUT(1.25、1.5、1.75g/kg)均具有抗PF作用，可通过回调亚牛磺酸、5磷酸脱氧核糖、1磷酸脱氧核糖和白三烯C4，作用于牛磺酸和低牛磺酸代谢、磷酸戊糖途径和花生四烯酸代谢；通过下调TGF-1/Smads信号通路中TGF-β1, Smad-3和α-SMA mRNA的表达，上调Smad-7 mRNA的表达，抑制炎性因子释放及促纤维因子表达，发挥抗炎、抗氧化、抗纤维化作用，以PET中剂量、BUT低剂量效果最佳。4) PET的GC/MS表明不饱和脂肪酸占73.20%（油酸占28.87%、亚油酸占38.69%），饱和脂肪酸占19.66%(以棕榈酸为主)。5)首次从BUT中分离鉴定得到苦杏仁苷(AMY)、野黑樱苷单体；AMY在BUT中所占质量比重为47.72%。6)以AMY为参照峰，分别建立十种产地扁桃HPLC指纹图谱、AM及其近缘种BUT的HPLC指纹图谱。7）AM油的GC/MS表明不饱和脂肪酸占总量的76.55%(油酸占23.81%，亚油酸占47.11%)，饱和脂肪酸以棕榈酸为主,含量为21.73%；安全性评价研究表明属于无毒级。8)AM油低、中、高剂量(5、10、15 g/kg)和AMY低、中、高(20、40、80 mg/kg)具有抗PF作用，分别以中、低剂量组(5、20g/kg)效果最佳，AM油(尤其油酸和亚油酸)和AMY是AM发挥抗PF的主要药效物质基础。AM油可能通过回调溶血酶PE、PC等6个与PF相关关键生物标志物，AMY通过回调9,10-二羟基-12-十八烯酸、溶血酶PC等8个与PF相关的关键生物标志物，进而参与亚油酸的新陈代谢、甘油磷脂代谢、亚麻酸代谢来发挥抗PF作用。9）发表论文26篇(SCI收录6篇，中文核心12篇)，培养硕士3名。