LncRNA AP000320.6绑定PTEN蛋白抑制C-MET去磷酸化促进胃癌恶性进程机制研究

Abnormal tyrosine kinase activity is an important cause for malignant progression and considered as an vital target for treatment of gastric cancer. LncRNAs play crucial roles in malignant progression and signaling pathway. Our preliminary results showed that: ①AP000320.6 was significantly overexpressed in gastric cancer, and knockdown of AP000320.6 decreased expression of C-MET and P-MET contributing to inhibition proliferation and migration.②RIP and MS assay revealed that AP000320.6 was bound to Ago2 and PTEN. So that, we hypothesized that the overexpression of AP000320.6 could acted as “CeRNA” to regulate C-MET expression by sponging miR34/449; and bounded PTEN to suppress the dephosphorylation of C-MET, thereby affecting RAS、PI3K and STAT signaling pathway contributing to malignant progression in gastric cancer. We will evaluated our hypothesis by ChIP、Pulldown etc techniques. It will elucidate the mechanisms of LncRNAs at the post-translational level and the MET signaling pathway in gastric cancer.

酪氨酸激酶活性异常是导致胃癌恶性进程的重要原因及治疗靶点。LncRNAs在胃癌恶性增殖、侵袭转移及信号通路中起重要调控作用。前期研究结果：①C-MYC促进LncRNAAP000320.6转录，在胃癌中显著上调；下调AP000320.6表达，C-MET及P-MET表达下调，抑制胃癌细胞恶性表型。②核质分离、RIP、pulldown及质谱实验结果AP000320.6亚细胞定位于细胞质，与Ago2、PTEN绑定。本课题组拟通过组织、细胞及动物模型，运用FISH、ChIP、荧光素酶实验等证实：C-MYC促进AP000320.6在胃癌中异常高表达；AP000320.6在细胞质中作为“CeRNA”与miR34/449竞争性吸附；并绑定PTEN，抑制C-MET去磷酸化，参与胃癌恶性进程及靶向药物疗效，此研究丰富LncRNAs的调控机制，完善MET信号通路在胃癌中的功能及机制。

结直肠癌 (CRC) 是世界上第四大常见恶性肿瘤，主要死亡原因是转移。肿瘤的特征包括增殖、转移、异常代谢和血管生成等。代谢重编程在肿瘤发生发展中起着至关重要的作用。因此，深入探索代谢重编程机制对了解结肠癌恶性转化分子机制及改善预后具有重要意义。长非编码RNA（LncRNA ）在肿瘤异常表达并与预后相关，在转录、转录后等水平调控下游靶基因表达，参与肿瘤的恶性转化过程。LncRNA ZFAS1 调节 miRNA 作为癌基因促进结肠癌增殖和转移，但在代谢重编程中的调控机制仍然未知。. ZFAS1在结肠癌组织中异常高表达并与不良预后相关。敲降ZFAS1表达，SW480 和 RKO细胞株增殖、侵袭迁移能力下降、G1/S周期抑制。si-ZFAS1后发现差异表达基因主要参与脂肪酸异常代谢，qRT-PCR 和WB证实si-ZFAS1，SREBP1、FASN 、 SCD1 及细胞内脂质含量表达显著下调。质谱、Puldown、及RIP等实验证实ZFAS1位于胞浆，与多聚腺苷酸结合蛋白2（PABP2） 结合，稳定SREBP1 mRNA的表达，下调PABP2表达后SCD1、FASN表达下调，PABP2 的过表达部分逆转 ZFAS1 抑制的细胞增殖。裸鼠皮下移植瘤模型及斑马鱼模型证实si-ZFAS1增殖及转移能力下降。因此：ZFAS1与PABP2绑定稳定SREBP1 mRNA水平，并激活其下游靶基因SCD1 和 FASN的转录，促进脂质积累，为肿瘤恶性表型转化提供生存优势，促进结肠癌的恶性进程。. 代谢重编程是肿瘤细胞的十大特征，促进肿瘤增殖、转移等恶性表型，是转化研究热点。不受控制的脂肪酸从头合成是脂肪酸代谢重编程的重要组成部分，参与肿瘤的恶性进程，深入研究脂肪酸代谢重编程机制对了解恶性肿瘤进展分子机制及探索新的治疗靶标具有重要的意义。本研究证实 ZFAS1 可以作为“癌基因”参与脂肪酸代谢重编程过程参与结肠癌的恶性进程，提示LncRNA在代谢重编程中可能发挥重要调控作用，是新的治疗靶标，针对LncRNA及代谢重编程调控分子研发新的药物或治疗策略对提高肿瘤治疗疗效具有重要理论意义。