丙型肝炎病毒cDNA在人肝癌细胞系中的表达

采用DNA重组技术，分别将丙型肝炎病毒核核心基因、核心基因至NS3基因以及全基因cDNA克隆至真核细胞表达载体pTM3中，尔后采用痘苗病毒/噬菌体T7多聚酶短暂表达体系，转染HepG2细胞，获得丙型肝炎病毒核心及非结构区蛋白的表达。在稳定表达研究方面，将重组质粒与新霉素抗性质粒在lipofectin介导下，共转染HepG2细胞，在G-418的选择压力下，获得新霉素抗性细胞克隆，技术6个月培养，仍能检测到丙型肝炎病毒mRNA及抗原的表达。证实重组质粒转染HepG2细胞模型获得成功。并观察了HCV阳性的丙型肝炎患者血清感染永生化的B细胞系后，在培养72小时后，即可在细胞内检测到HCVRNA负链，提示HCV可在该细胞系中较长时间存在、复制和分泌。