RIG-I转基因鸡的研制及其抗病毒效果研究

Avian influenza is one of the infectious diseases which can cause a huge damage, it is not only caused enormous economic losses to the breeding industry, also many countries has reported the human's death cases when infected to the avian influenza, it once bring panic in the society. Ducks and wild waterfowl perpetuate all strains of influenza viruses in nature. In their natural host, influenza viruses typically cause asymptomatic infection and little pathology. Ducks are often resistant to influenza viruses capable of killing chickens. Studies have shown that the main factors leading to this phenomenon is that the ducks and some wild waterfowl containing immune-related genes - retinoic acid inducible gene I (RIG-I), it can lead to production of interferon, and thus effectively inhibit and eliminate the infected virus. RIG-I is an important part of the body's innate immune system, and plays a huge role in the process of inhibition and clearance the invading virus. Because the absent of RIG-I gene in chicken, and therefore can not be effective and rapid response to invading viruses, making the viruses numerous replicate in the body, and caused the outbreak of disease. In this study, we aim to prepare a transgenic chicken which import the duck RIG-I gene. Through infect the avian influenza virus, we aim to sift a new transgenic chicken which can effectively resist the avian influenza virus and clarify the RIG-I gene resistance mechanism in vivo. This study has a certain scientific significance in prevention and treatment of the avian influenza.

禽流感是一种危害巨大的烈性传染病，它不仅对养殖业造成巨大的经济损失，而且已有很多禽流感致人死亡的病例，一度引起社会的恐慌。在自然界中，鸭子和一些野生水禽对禽流感具有天然的防御能力，它们通常会引起无症状感染或很小的致病性。已有研究表明，导致这一现象的主要因素在于鸭子和部分水禽含有免疫相关基因-维甲酸诱导基因I（RIG-I），它可以诱导机体产生干扰素，从而有效的抑制和消除病毒。RIG-I是机体固有免疫系统的重要组成部分，在抑制和清除入侵病毒的过程中起着巨大的作用，而鸡体内却缺少这种基因，因此不能有效快速的对入侵的病毒产生应答，使得病毒在体内大量复制而爆发疾病。本研究将鸭RIG-I基因转入鸡体内，制备新型的转基因鸡，并以禽流感病毒进行感染，从而筛选可有效抵抗禽流感的转基因鸡，同时在细胞和活体水平上阐明RIG-I基因的抗病机理，这一研究将对禽流感的防治具有一定的科学意义。

RIG-I是机体内免疫系统的重要组成部分，在抑制和清除入侵病毒的过程中具有重要的作用。鸡体内因缺少这一基因，因此在病毒入侵机体时，对病原反应不及时，使得病毒大量复制从而引起烈性传染病的爆发。本项目将鸭RIG-I基因转入鸡体内，制备新型的转基因鸡，并以新城疫病毒进行感染，从而筛选可有效抵抗病原体的转基因鸡，同时在细胞和活体水平上阐明RIG-I基因的抗病机理。本项研究取得的主要研究结果包括：1、克隆鸭RIG-I基因，获得三种鸭RIG-I基因的剪接体，并在细胞水平上进行了抗病毒功能验证。2、筛选抗病毒效果最佳的RIG-I基因，构建慢病毒载体，并包装慢病毒，通过病毒的纯化与浓缩，不同包装批次慢病毒的效价分别为1.6×109TU/mL，1.83×109 TU/mL和2.32×109 TU/mL，可用于转基因鸡的制备。3、慢病毒胚盘下腔注射法制备转基因鸡，并通过PCR进行筛选阳性后代，获得的阳性后代12只，其中公鸡7只，母鸡5只。阳性后代进行交配，孵化后代并进行RIG-I基因的筛选，获得阳性后代。4、阳性后代进行新城疫病毒攻毒，与阴性对照相比，阳性后代的抗病毒效果有一定的提高。5、完成了鸡胚原始生殖细胞的分离，纯化，体外培养等相关研究，为转基因鸡的制备开辟新的方法。6、本项目发表中文核心期刊论文1篇，发表会议论文1篇，投稿SCI论文1篇，申请国家发明专利2项，其中1项已获得授权，1项正在审核中。培养硕士研究生2名。