大小鼠腹白线自由基传导现象的研究

The linea alba is a common connective tissue in mammal with biomechanical function. While investigating the free radical distribution in living rats, we accidentally discovered that the linea alba emitted intense green fluorescence corresponding to the intracellular free radical indicator, revealing the possibility that free radicals are either localized or transported along the linea alba, suggesting a novel important role related to free radicals of the linea alba. In order to further experimental confirmation, we employ: 1. 6 murine model, including transgenic mice; 2. different types of free radical in vivo and in vitro and related index determination methods; 3. fibroblast, T cell and mast cell identification; 4. Investigating the potential role of gap junction，cellular membrane potential and mitochondrial membrane potential in linea alba. This study aims to elucidate: 1. the type and concentration of free radical in linea alba, and the factors influencing the distribution pattern of free radical; 2. the cell types and properties responsible of free radical in linea alba; 3. electrical characteristics of free radical transportation along the linea alba and the channel and mechanism of free radical transportation. The expected results will establish a new critical physiological role for the linea alba as a connective tissue in mammals, and confirm the existence of a free radical disposal system consisting of collection, transportation, storage and disposal in mammal independent of vessel and nerve systems, shedding light on life science, medical and healthcare research to eventually lead to major breakthroughs.

腹白线是腹壁肌层正中线上的结缔组织，由两侧腹直肌鞘交织而成，主要功能表现在生物力学上。我们在研究活体动物自由基分布形态过程中却发现，经过全身自由基探针标记的大鼠所显示的绿色荧光信号分布在腹白线上。这引出了腹白线能够产生、传导或储存自由基的假设。为了进一步研究和验证，本项目拟采用：1. 6种大小鼠模型，包括转基因小鼠模型；2. 不同类型的体内、外自由基和相应指标的检测方法；3.成纤维细胞、T淋巴细胞和肥大细胞的鉴定技术；4.间隙连接蛋白40抗体、细胞膜电位和线粒体膜电位的标记方法。旨在阐明：1. 腹白线自由基的种类和含量及其影响因素；2. 腹白线的细胞种类和特性；3. 是否通过电子传递方式传导自由基。结果将有助于发现结缔组织除生物力学之外的生理功能；有利于探索、研究、发现有别于血管、神经的能够收集、传导、储存、处理呼吸代谢产生的自由基的系统；可望为生命科学研究和医学研究的突破提供新的思路。

目的：腹白线是腹壁肌层正中线上的结缔组织，由两侧腹直肌鞘交织而成，主要功能表现在生物力学上。我们在研究活体动物自由基分布形态过程中却发现，经过全身自由基探针标记的大鼠所显示的绿色荧光信号分布在腹白线上。这引出了腹白线能够产生、传导或储存自由基的假设，并研究线粒体与自由基的相关性和传导方式。.方法：构建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)转基因小鼠模型，分别采用T-AOC法、盐酸羟胺法、DPPH法和ABTS法测定胶原蛋白模拟肽（CMP）、胶原蛋白肽混合物（CP）及其组成氨基酸脯氨酸和甘氨酸的抗氧化活性，并用圆二色光谱法测定CMP和CP的二级结构。与福建省中医药大学共同进行，采集75名过敏性鼻炎志愿者，分为三组，组1为进行胞内自由基清除剂TAT-SOD穴位抗氧化干预，组2为穴位安慰剂干预，组3是对鼻腔进行胞内自由基清除剂TAT-SOD穴位抗氧化干预。最终组1有21人完成实验，组2有17人完成实验，组3有18人完成实验。5名受试者，每人需先、后进行空白跟踪以及红茶、乌龙茶和绿茶茶汤饮用对人体经络穴位电压影响的跟踪测定，每人共计4次跟踪测定。前、后两次测定需相隔3d以上。对受试者的饮茶实验跟踪均在下午2:00至4:00时间段完成。.结果：1. 通过构建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)转基因小鼠模型，发现在发育期间超氧阴离子自由基主要沿其腹白线呈线性分布，并随日龄的增加逐渐向上延伸；同时，其荧光强度在每天的11:30-13:30间达到峰值；2. 胶原蛋白肽混合物（CP）对清除超氧自由基有活性，胶原蛋白本身稳定的3股螺旋结构可能就是其抗氧化活性不明显的原因，而胶原蛋白肽的抗氧化活性的发挥有赖于肽键对氨基酸残基的连接作用以及氨基酸侧链对自由基的易接近性；3. 人体实验验证特殊部位的结缔组织（穴位）清除自由基能够达到治疗的效果；4. 针对自由基的得失电子的特性，穴位清除自由基能够代表体表电位。.结论：初步证实了哺乳动物体内的自由基在结缔组织中以电子移动的方式传导及有规则的分布，暗示着一个由结缔组织组成的用于收集、储藏、传导和处理由线粒体泄露的电子的系统存在的可能性。