锌指蛋白RN181在肝癌转移中的作用及分子机制

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most important diseases which seriously harms human health. And there is no effective therapy for metastatic HCC of late stage yet now.Target therapy represented by Sorafenib has brought new hope for hepatocarcinoma patients. Zinc finger proteins involve in many biological processes including tumorigenesis and development of cancer. In 2011we first reported RN181 which is a new C3HC4 type zinc finger protein may be a novel tumor suppressor, the reasons are as follows. There is high expression of RN181 in HCC tissues versus lower expression in normal liver tissues. Additionally, RN181 could inhibit the growth of human HCC cell in vitro and neoplasia formation in vivo through the inhibition of ERK/MAPK signaling . However, whether RN181 participates in HCC metastasis in vivo is still unknown now. Hence, based on our previous research, this project aims at studying the role of RN181 in HCC metastasis , combined with cell culturing, animal transfer models and clinical tumor specimens, and using modern experimental methods such as proteomics technology, ingenuity pathway analysis (IPA), coimmunoprecipitation (coIP), laser scanning confocal microscopy,etc. Moreover, the details of RN181 regulating the downstream protein molecules and modulating important signaling networks in HCC metastasis would be investigated systematically，in order to elucidate the molecular mechanisms of RN181 in HCC metastasis and provide fresh frame of mind for the research and development of new target therapy.

肝癌是严重威胁人类健康的疾病，对晚期发生转移的肝癌目前尚无有效的治疗方法。以Sorafenib为代表的分子靶向治疗给肝癌患者带来新的希望。锌指蛋白参与众多重要的生物学过程，包括癌症的发生发展。RN181是一个新的C3HC4型锌指蛋白，我们2011 年首先报道它可能是一个新的抑癌分子：RN181低表达于肝癌组织而高表达于正常肝组织，通过MAPK-ERK途径抑制肝癌细胞的体外生长和体内成瘤。然而，RN181是否参与肝癌体内转移，目前一无所知。因此，本项目在我们前期研究的基础上，结合体外细胞培养、体内动物转移模型和临床肿瘤标本，采用蛋白质组学技术、IPA分析、免疫共沉淀、激光共聚焦等现代实验方法，研究RN181在肝癌转移中的作用。并对RN181如何调控下游蛋白分子，调控肝癌转移中重要的信号网络，进行系统研究，旨在阐明RN181在肝癌转移中的分子机制，为研发新的靶向治疗提供新思路。

肝癌是严重威胁人类健康的疾病，对晚期发生转移的肝癌目前尚无有效的治疗方法。锌指蛋白参与众多重要的生物学过程，包括癌症的发生发展。RN181是一个新的C3HC4型锌指蛋白，我们2011 年首先报道它可能是一个新的抑癌分子：RN181低表达于肝癌组织而高表达于正常肝组织，通过MAPK-ERK途径抑制肝癌细胞的体外生长和体内成瘤。然而，RN181是否参与肝癌体内转移，目前一无所知。因此，本项目在我们前期研究的基础上，结合体外细胞培养、体内动物转移模型和临床肿瘤标本，研究RN181在肝癌转移中的作用。实验结果显示：.1，在体外，采用Transwell实验，高表达RN181抑制肝癌细胞的迁移。在MHCC97L/MHCC97H/SK-Hep-1细胞中下调RN181的表达能够促进细胞的迁移。然而，在SMMC7721/Bel7402/QGY7703中干扰RN181的表达却是抑制细胞的迁移。在体内，无论是在SMMC7721细胞中还是在SK-Hep-1细胞中，高表达RN181抑制肝癌细胞的体内转移而干扰RN181则是促进转移。.2，采用高通量测序，研究以上肝癌细胞中热点肿瘤相关基因的突变情况。结果显示，转移来源的细胞与非转移来源的细胞比较，存在着B-RAFv600e突变。提示RN181对细胞迁移能力的调节有可能因为细胞遗传背景的不同而表现为不同的调节机制。.3，基于SILAC标记-蛋白表达谱分析，差异结果用IPA软件分析。结果表示，RN181相关的蛋白参与众多信号途径的调控，包括MAPK-ERK，NF-kB，AKT，caspase凋亡等途径。而且，RN181能够通过调节NF-KB调节细胞的迁移。.4，酵母双杂交和免疫共沉淀实验寻找RN181的相互作用蛋白，结果显示，RN181可以和RPS3等蛋白发生相互作用。而RPS3等蛋白均能调节肝癌细胞的迁移。而且， RPS3都能调节NF-kB信号途径的活性。因此，RN181有可能能够通过RPS3对NF-kB信号通路的调节从而调节肝癌细胞的转移。.5，为了更深入地揭示RN181的生理功能和它在肝癌发生发展中的作用，我们还通过TALEN的方法构建了RN181的基因敲除小鼠模型。. 通过以上研究的实验结果，将有机会深入地揭示RN181在肝癌发展中的分子机制，为我们将来描绘肝癌发展的机制图谱提供有力线索，也为肝癌的靶向治疗提供新的选择和新思路。 .