新基因F10参与妊娠滋养细胞疾病病理机制的研究

我们前期的研究中，采用抑制性消减杂交的方法，建立了完全性葡萄胎与正常早孕绒毛间的差示cDNA文库，从中筛选到在葡萄胎等滋养细胞肿瘤高表达的新基因F10。荧光定量PCR检测结果显示：F10在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌组织中全部呈阳性表达，且按上述顺序依次增强；应用siRNA基因沉默技术的研究结果表明，F10基因沉默后，可导致KLE细胞系大量凋亡；推测F10基因很有可能参与妊娠滋养细胞疾病的病理发生过程，并与细胞增殖等调节有关。在本课题中，我们将采用基因转染、基因芯片检测、基因沉默、荧光定量PCR、MAPK等信号激酶检测、信号通路阻断、细胞增殖及侵袭性测定等技术，探讨F10基因参与葡萄胎、绒癌等妊娠滋养细胞病的分子病理机制，F10基因功能与滋养细胞增殖、侵袭调节的关系，筛选与F10功能相关的细胞内信号转导通路，了解F10基因功能与MAPK等信号转导激酶的关系，为治疗妊娠滋养细胞病提供新思路。

本项目中我们探讨新发现的基因F10参与滋养细胞侵入异常相关妊娠疾病的机理。经过本项目研究，取得以下结果：(1)成功制备高效价新基因F10编码蛋白的单克隆抗体，并验证F10蛋白在葡萄胎组织中高表达，而在滋养细胞侵入不足的子痫前期胎盘组织中表达降低，提示F10很可能与滋养细胞的增殖和侵入调节有关；(2)通过基因转染过表达及RNAi技术，证实F10是参与滋养细胞系增殖与凋亡调节过程的新基因；(3)通过对子痫前期等胎盘组织中蛋白表达的检测，证实多种基质金属蛋白酶/抑制因子表达的变化与滋养细胞侵入不足妊娠相关疾病的病理过程相关；(4)检测不同胎盘绒毛组织中F10基因表达的变化，证实葡萄胎患者胎盘中F10蛋白表达较高，子痫前期及胎儿生长受限（FGR）胎盘中F10蛋白缺失或表达减少，说明F10表达变化与滋养细胞侵入异常相关妊娠疾病的发生发展有关；(5)采用HTR8/SV.neo细胞系为研究对象，证实F10基因过表达促进滋养细胞增殖，而F10基因沉默则诱导滋养细胞凋亡，其机制涉及MAPK信号通路；(6)Transwell实验表明，新基因F10参与绒癌细胞系侵袭性调节，其原理与影响基质金属蛋白酶活性及细胞增殖活性相关；(7)采用裸鼠成瘤模型，探讨F10基因干预对绒癌细胞系成瘤性的影响及其机制，发现F10基因可增强绒癌细胞系在裸鼠体内的致瘤性，并可通过上调MMP-2、-8、-9、-11、-15、-16、-19的表达，下调TIMP-1、-3、PAI-1表达，促进绒癌细胞的增殖，以促进绒癌侵袭和转移，这一过程可能通过STAT3及JNK信号通路实现；(8)利用裸鼠成瘤模型进一步实验证实，F10可能通过上调细胞周期蛋白cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7的表达，加快细胞周期进程，促进细胞增殖，抑制细胞凋亡；(9)采用全转录组测序技术检测，F10基因沉默JEG-3细胞中发生表达显著变化（>2倍）的基因共104条，经Go分析和KEGG分析发现F10基因功能与多条细胞内信号通路相关；(10)采用iTRAQ技术，发现敲低F10基因表达的JEG-3细胞中，表达上调蛋白53种，下调蛋白45种，初步筛选出与F10功能密切相关的信号通路。以上研究内容，均围绕我们发现的新基因F10功能及其机制而展开，国内外无类似报道，属原始创新。