PPAR-γ对IgA肾病小管细胞损伤中Toll样受体信号通路的影响和机制研究

我们前期已明确血管紧张素II（AngII）参与了IgA肾病肾小球系膜细胞与肾小管上皮细胞间对话（球管对话），从而介导了肾小管上皮细胞的损伤，并证实了过氧化物酶体增殖物受体（PPAR-γ）可在多个水平抑制AngII信号通路，在该损伤中发挥保护作用。本项目将进一步研究AngII可能的下游因子Toll样受体（TLRs）信号通路在肾小管细胞损伤中的作用，并探讨PPAR-γ对TLRs信号通路的影响和分子机制。首先，检测IgA肾病患者血、尿和肾脏标本中TLRs信号通路相关分子的表达；其次，建立IgA肾病肾小管细胞损伤的体外模型，研究TLRs信号通路相关分子在该细胞损伤中的病理作用，对球管对话机制进行延伸，并观察PPAR-γ对TLRs信号通路的影响；最后，建立IgA肾病动物模型，观察PPAR-γ激动剂对该模型中的小管细胞TLRs信号通路的影响以及其细胞保护和抗炎作用，从为IgA肾病临床治疗提供新的思路。

研究工作小结：.1、采用给Lewis大鼠饲喂BGG的方法，成功复制了IgA肾炎动物模型。观察了该模型大鼠肾组织和血清中TLR4, PPAR-γ以及炎症因子（IL-1β，TNF-a ，TGF-β，ICAM-1等）的表达。发现该模型中，肾组织和外周血的TLR4表达显著增加，而TLR4抑制剂TAL242可以降低蛋白尿，减轻系膜细胞和系膜基质增殖， TLR4与PPAR-γ可以相互抑制，相互影响。.2. 观察并比较了PPAR-γ激动剂吡格列酮、RAS受体阻断剂替米沙坦及替米沙坦+吡格列酮对该模型大鼠尿蛋白排泄、血肌酐、肾脏病理及TLR4有关炎症介质表达的影响，发现二者有协同保护肾脏作用。.3. IgA肾病患者Treg表达及其意义探讨：共纳入 IgA肾病患者21例，以7特发性膜性肾炎患者作对照组。采用抗Foxp3单克隆抗体免疫组织化学检查。研究发现，与对照组相比，IgA肾病和膜性肾病患者肾组织Foxp3阳性细胞的表达均增高。IgA肾病患者肾组织Foxp3表达较膜性肾病者更明显。IgA肾病患者中，系膜增生程度与Foxp3阳性淋巴细胞数无明显相关性。.4、探讨TNFα活化的小管上皮细胞中PPAR-γ和盐皮质激素受体(MR)之间的交互对话。方法：HK-2细胞予吡格列酮（5 μM），MR拮抗剂依普利酮（5 μM），或两者联合治疗，再予以TNF-α（20 ng/ml）刺激。用RT-PCR检测ICAM-1和IL-6基因表达，用Western blot检测蛋白表达，用EMSA检测NF-κB的核转移情况。结果：TNF-α可激活HK-2细胞，表现为剂量依赖地上调ICAM-1和IL-6，下调节PPAR-γ表达。TNF-α也增加NF-κB核转位。吡格列酮和依普利酮在降低ICAM-1和IL-6的表达、减轻NF-κB活化中存在协同效应。PPAR-γ拮抗剂GW9662明显减轻吡格列酮对TNF-α诱导的ICAM-1和IL-6高表达的保护作用。该结果表明，吡格列酮以依赖于PPAR-γ的方式，抑制TNF-α介导的NF-κB信号通路激活。MR拮抗剂也可改善TNF-α引起的PPAR-γ表达下降。