新型骨肉瘤相关抗原基因PBF对骨肉瘤生物学功能的影响及其分子机制研究

骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤。现有治疗方案的局限性迫切需要从骨肉瘤自身特点着手，系统评估以寻找新的解决策略。我们前期筛选获得一种新型骨肉瘤相关性抗原基因PBF；并发现和正常及其它骨肿瘤组织对比，它在骨肉瘤细胞系和骨肉瘤组织中高表达；干涉PBF后在细胞和动物水平骨肉瘤细胞SOSP-9607生物学功能均受到抑制；而且我们构建了具有免疫力的SD大鼠骨肉瘤荷瘤动物模型和骨肉瘤标本库。本课题拟在此基础上，首先对PBF在骨肉瘤中的表达状态进行系统分析，明确其在诊断和预后中的生物学意义；然后利用PBF高表达和低表达的细胞株，从细胞和动物水平检测PBF对骨肉瘤生物学功能的影响；随后利用基因工程方法制备肿瘤疫苗在体检测其对骨肉瘤的抑制效果；最后分子水平探寻PBF在介导骨肉瘤发生发展中的可能机制。本研究将为PBF自身功能研究提供新的实验依据，更为骨肉瘤的基因和免疫治疗策略提供新靶点。

骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，现有治疗方案的局限性迫切需要从骨肉瘤自身特点着手，系统评估以寻找新的解决策略。本课题组在前期工作中通过基于体液免疫的重组cDNA 文库的血清学分析方法（Serologic Analysis of Recombinant cDNA Expression Library, SEREX），获得并鉴定了一种新型骨肉瘤相关抗原基因PBF（Papillomavirus Binding Factor），初步的研究表明其可能与骨肉瘤的进展相关。本研究课题以此为切入点，首先系统评价了PBF与骨肉瘤发生发展的相关性，实验结果表明：PBF在骨肉瘤组织中的表达率显著高于骨软骨瘤组织，二者之间差异具有统计学意义(P<0.01)，PBF的表达与患者的外科Enneking分期及转移情况等因素呈正相关，与患者的年龄、性别、肿瘤直径、组织学分型无明显关联；随后我们利用分子生物学手段系统的研究了PBF对骨肉瘤细胞功能的影响，以SaoS2和U2OS为细胞模型，实验结果显示：上调PBF的表达后，细胞的增殖速度加快、细胞周期中的S期比例增加、侵袭和迁移能力增强，下调PBF表达后可逆转上述表型；荷瘤鼠动物模型的实验结果显示：过表达PBF可减少裸鼠的生存期而干涉PBF的表达可适当延长裸鼠的生存期；过表达PBF可促进实体瘤的生长而干涉PBF可明显抑制其增长；最后我们利用免疫共沉淀结合质谱分析的方法系统获得了SaoS2细胞中能与PBF相互作用的分子，发现其与RNA的加工（RNA processing and modification）、染色质的结构与动力（Chromatin structure and dynamics）、细胞周期调控（Cell cycle control）、氨基酸的转运与代谢（Amino acid transport and metabolism）、细胞信号转导（Signal transduction mechanisms）、细胞骨架（Cytoskeleton）等功能相关，目前正在对数据进行深度挖掘，后续将对所获得的分子进行相关功能的验证。通过本课题的研究明确了PBF与骨肉瘤发生发展的关系，初步探讨了PBF影响骨肉瘤生物学功能的分子机制，为PBF自身功能研究的拓展提供了新的、可靠的实验依据，更为骨肉瘤的基因和免疫治疗策略提供了新靶点。