白纹伊蚊唾液腺吸血传病相关蛋白的药理学活性研究

蚊虫唾液组分蛋白具有抗凝血、抗炎及免疫调控的功能。探讨蚊虫唾液组分蛋白的构成与功能及其调控宿主免疫功能的分子机制正成为当前研究的热点。在前国家基金（No:30600515）的资助下，课题组已从白纹伊蚊唾液腺转录组水平筛选到与吸血相关的、特异表达在雌蚊唾液腺组织的基因6条，与吸血相关、雌雄蚊唾液腺均表达，但雌蚊唾液腺高表达的基因5条，与吸血相关但在组织中均有表达的基因1条。本研究拟在此基础上，进一步利用蛋白质组学技术筛选伊蚊唾液腺与登革病毒感染相关的重要功能蛋白，同时构建药理学检测平台，进而对从转录组水平和蛋白质组水平筛选到的重要靶标蛋白进行全长克隆与表达，研究其抗凝血、抗炎及免疫调控的功能，以期获得新的药理学活性蛋白。本研究还可初步揭示唾液组分蛋白与宿主相互作用的分子机制，从而可望获得媒介暴露的流行病学标记，更重要的是还可为虫媒病的防治提供新的思路。

蚊虫是最重要的医学昆虫，其唾液腺分泌的唾液是一种具潜在药理活性的液体，对脊椎动物宿主具有抗凝血、抗炎和调节宿主免疫功能的作用，在促进蚊媒吸血及传病上具有重要意义。探讨蚊虫唾液组分蛋白的组成、生物学功能及其调控宿主免疫功能的分子机制是当前研究的热点。在国家自然科学基金的资助下，我们首先对蚊虫唾液腺匀浆粗蛋白生物学活性进行了探讨，初步证实白纹伊蚊唾液腺匀浆粗蛋白具有抗凝血、免疫调控的功能，并搭建生物学功能研究的技术平台；其次分别采用2D技术与iTRAQ技术两种蛋白质组学技术构建了蚊虫吸血前后与登革病毒感染前后蚊虫唾液腺差异蛋白质组图谱，筛选到与吸血、登革病毒相关的唾液腺蛋白25个；进而构建5个靶标蛋白原核表达载体并进行了表达,最后对表达蛋白构建了组织表达谱并进行了初步的功能分析。已获得一个特异表达在雌蚊唾液腺的甘露糖特异结合的C型凝集素(MBL)，体外具有凝集金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的作用。血小板聚集抑制试验表明该蛋白对胶原 I 和凝血酶诱导的血小板聚集抑制作用显著，具有量效关系。离体脾细胞活性检测显示高浓度MBL蛋白具有抑制脾细胞增殖的作用。此外，我们采用生物信息学方法，从埃及伊蚊全基因组中识别出23条SERPIN基因，通过构建组织表达谱筛选获得3个特异表达在雌蚊唾液腺SERPIN基因。这些结果的获得为下一步深入探讨这些靶标蛋白的生物学功能，阐释蚊虫唾液蛋白与宿主相互作用的分子机制奠定了坚实的基础。