TLR4与H9N2禽流感病毒诱导小鼠急性肺损伤的关系研究

有关病毒与细胞相互作用，特别是固有免疫应答与病毒致病性的研究，是细胞生物学的前沿领域。本项目从细胞和整体水平探讨Toll样受体4（TLR4）介导的固有免疫应答与H9N2-AIV诱导小鼠急性肺损伤（ALI）之间的关系。用灭活病毒粒子分别处理TLR4基因突变和野生型小鼠的肺巨噬细胞，观察TLR4信号通路的时空转换，从细胞水平初步揭示H9N2-AIV是否启动了TLR4介导的固有免疫应答。用H9N2-AIV活病毒感染小鼠，动态观察并比较不同基因型小鼠的发病过程，及靶器官TLR4-NF-κB信号通路活性的改变，揭示TLR4介导的固有免疫应答与H9N2-AIV诱导的小鼠ALI之间的关系。用灭活病毒粒子处理小鼠，比较不同基因型小鼠的病理反应，进一步解读TLR4介导的固有免疫应答与病毒PAMPs之间的识别关系。本项目不但可加深对动物流感病理生物学的认识，同时对充实固有免疫应答理论具有普遍的科学意义。

有关病毒与细胞相互作用，特别是固有免疫应答与病毒致病性的研究，是细胞生物学的前沿领域。本项目从细胞和整体水平探讨Toll样受体4（TLR4）介导的固有免疫应答与H9N2-AIV诱导小鼠急性肺损伤（ALI）之间的关系。用灭活病毒粒子分别处理TLR4基因突变和野生型小鼠的肺巨噬细胞，观察TLR4信号通路的时空转换，从细胞水平初步揭示H9N2-AIV是否启动了TLR4介导的固有免疫应答。用H9N2-AIV活病毒感染小鼠，动态观察并比较不同基因型小鼠的发病过程，及靶器官TLR4-NF-κB信号通路活性的改变，揭示TLR4介导的固有免疫应答与H9N2-AIV诱导的小鼠ALI之间的关系。用灭活病毒粒子处理小鼠，比较不同基因型小鼠的病理反应，进一步解读TLR4介导的固有免疫应答与病毒PAMPs之间的识别关系。本项目不但可加深对动物流感病理生物学的认识，同时对充实固有免疫应答理论具有普遍的科学意义。我们：按计划要点完成本项目：内容包括（1）小鼠肺泡巨噬细胞的培养：从支气管肺泡灌洗液（BALF）获取肺泡巨噬细胞进行培养；（2）在细胞系统观察 H9N2-AIV是否启动了TLR4介导的固有免疫应答：前期研究发现Hebei/2008/4（H9N2）简称HB/4（H9N2）对小鼠有强致病性。为阐明其致病机理，本研究首先将HB/4（H9N2）鸡胚毒经MDCK细胞传代制备细胞毒并用蚀斑试验评价其细胞毒力；然后给清洁级昆明小鼠颈部皮下连续5d注射内毒素（1μg/g/d体重），制备内毒素耐受小鼠；最后用HB/4（H9N2）细胞活毒和灭活毒分别感染耐受小鼠和对照小鼠腹腔巨噬细胞，用免疫放射法比较感染后12h、18h培养细胞上清液中IL-6和IL-1β含量；观察HB/4（H9N2）对内毒素耐受小鼠腹腔巨噬细胞炎性因子的诱导作用。（3） 观察TLR4是否介导了H9N2-AIV诱发的小鼠ALI：用H9N2-AIV活病毒分别鼻腔感染TLR4基因突变型和野生型小鼠，动态观察并比较病毒感染不同基因型小鼠的发病（急性肺损伤）过程，病毒在靶器官中的增殖曲线以及靶器官TLR4-NF-κB信号通路活性的时空转换。根据试验结果，综合分析基因突变型和野生型小鼠对H9N2-AIV的易感性是否存在差异，基因突变型小鼠的发病率和急性肺损伤比野生型小鼠轻，推断TLR4介导了H9N2-AIV诱发的小鼠ALI。