转录因子KLF8在肝细胞癌血管生成中的作用研究

原发性肝癌是我国位列第二位的癌症死因，肝细胞癌（HCC）占其中的90%。HCC富血管化，缺少有效的系统治疗方法，抗血管生成治疗具有好的前景。HCC中调控血管生成的分子机制尚不清楚。KLF8是一个转录因子，我们发现HCC中KLF8过表达可以促进肿瘤侵袭并提示不良预后；下调KLF8的HCCLM3分泌MMP2减少；VEGF的mRNA水平也显著降低。检测50例HCC组织标本中的KLF8和VEGF mRNA水平,提示两者有很好的相关性，故KLF8可能在HCC中调控血管生成。本项目考察KLF8与血管生成相关因子间的关系，用裸鼠体内成瘤试验、鸡胚绒毛膜尿囊膜试验、毛细管样管形成试验考查KLF8在HCC血管生成中的作用及PI3K/Akt 信号通路在其中的作用。这可能是HCC中调控血管生成的新机制，有助于阐明HCC富血管化及高血管侵袭性的机理，为有效抑制HCC新血管生成及转移提供新的靶点和治疗策略。

在我国，肝癌是位列第二的癌症死因。HCC占中国原发性肝癌的90%。手术切除有很高的术后复发的发生率；肝移植因缺少供体而受限；对于无法切除的HCC，如果肿瘤局限在肝脏，不同的局部治疗仅可以用来缓解症状和延长生存；传统的细胞毒性化学疗法对HCC并不有效，对于有远处转移的HCC病人也没有被证实有效的系统性治疗。HCC是最富血管化的肿瘤之一，血管发生在肝癌发生的早期阶段、生长和转移中发挥着一个重要作用，HCC具有高血管侵袭的特征，其血管生成活性与血管侵袭的危险度和转移相关。然而调控HCC血管生成的机制尚不清楚。KLF8是一个调节基因转录的核蛋白家族Krüppel-like factors (KLFs)中的一员。KLF8表达在正常肝细胞系L-02中较低，而在肝癌细胞系中表达高，且和肝癌细胞系的侵袭转移潜能存在一定的正相关性；在肝癌组织中KLF8的表达水平显著高于癌旁与正常肝组织，在肝细胞癌中KLF8过表达可以促进肿瘤侵袭并提示不良预后。KLF8可能在HCC中调节血管生成。考察了KLF8与血管生成相关因子：VEGF、Ang1、Ang2、MMP-2、HIF1-α、Tie2间的关系，结果提示：在SMMC7721中上调KLF8表达，VEGF、Ang2、HIF1-α 及 MMP2的 mRNA 水平增加(p<0.05)， Tie2、Ang1 的 mRNA 表达水平无差异（p﹥0.05），Western Blot提示VEGFA蛋白水平上调；下调KLF8表达后, Ang2 和 HIF1-α 的mRNA水平降低(p<0.05)，而VEGF、Tie2、Ang1的 mRNA水平无明显变化（p﹥0.05）。Western blot提示在Hep G2中上调KLF8的表达可使VEGFA的蛋白质水平升高。Reporter Assay 明确Hep G2中KLF8诱导与VEGFA启动子活性；染色质Chip Assay明确KLF8通过与启动子区域的CACCC结合从而调控VEGFA的转录。MicroRNA表达谱检测筛选出了23个可能在肝癌的发生发展中发挥重要作用的，受KLF8调控的MicroRNA。研究初步明确了KLF8在肝细胞癌中参与血管生成的调节，并明确了KLF8调控VEGFA表达的机制。目前其他相关机制及功能研究，如：鸡胚绒毛膜尿囊膜试验、毛细管样管形成试验及PI3K/Akt信号通路研究尚在进行中。