复发或难治NK/T细胞淋巴瘤中关键分子的研究

本课题组已利用质谱平台对非霍奇金淋巴瘤（NHL）血清差异表达蛋白质进行了初步筛选，鉴定出3个与疗效相关的关键蛋白质分子。在前期工作基础上，本申请项目拟对正常人、治疗有效、复发或难治NK/T细胞非霍奇金淋巴瘤患者（各30例血清标本）采用二维色谱（2D-LC）串联电喷雾二级质谱（ESI-MS/MS）分析，筛选差异表达蛋白质群，进行生物信息学分析，鉴定出不同疗效差异表达蛋白质分子，进一步扩大样本，应用RT-PCR和Western-blot分别在血清和淋巴瘤组织中验证评价这些蛋白质分子的差异表达水平，通过临床随访病例有效率、复发率和生存时间等进行临床验证，并对筛选出来的差异表达蛋白质分子进行功能研究，进一步阐明这些蛋白质分子在NK/T细胞淋巴瘤中的可能作用机制，为指导临床个体化治疗、疗效监测及预后评估开辟新思路和新途径，提高恶性淋巴瘤的治疗水平。

结外NK/T细胞淋巴瘤（ENKL）是一种具有高度侵袭性的淋巴系统肿瘤，预后很差。部分患者在治疗过程中产生耐药或者缓解后短期内疾病复发。对于治疗无效的患者，适时更改化疗方案可能延长患者的生存，改善患者的预后。目前，针对晚期ENKL患者，缺乏疗效预测的标志物。本研究通过收集晚期ENKL患者(治疗有效患者、治疗无效患者)治疗前、治疗后血清，采用液相色谱仪串联质谱技术，筛选组间差异表达蛋白。相较于治疗有效患者，在治疗无效患者鉴定了上调蛋白26个，下调蛋白8个。在治疗有效患者，治疗后下调蛋白10个，上调蛋白3个。我们挑选S100A9和α-1酸性糖蛋白（ORM1）为候选蛋白分子扩大血清样本量进行ELISA验证。治疗无效患者较治疗有效患者血清S100A9水平（p<0.0001）和ORM1（p<0.0001）均明显升高。对于筛选治疗无效患者，S100A9>62.0 ng/ml 的敏感性和特异性为81.5%，71.4% ； ORM1>1436ug/ml 的敏感性和特异性为85.2%，77.1%； S100A9联合ORM1的敏感性和特异性为100%，57.1%。 S100A9高表达组和S100A9低表达组2年总生存分别为40.2% vs. 76.6%, （RR=2.92, p=0.005），2年PFS分别为33.1% vs. 61.1%，(RR=2.61 p=0.011)。多因素分析显示血清S100A9为晚期ENKL患者的独立预后因素。肿瘤组织免疫组化显示，晚期ENKL患者肿瘤基质中S100A9的表达显著高于鼻增生和鼻炎患者，治疗无效患者肿瘤基质S100A9表达高于治疗有效患者。S100A9作为炎性蛋白分子，可以与细胞表面的TLR和RAGE受体结合，促进肿瘤的生长和侵袭转移。我们的研究显示，重组S100A9蛋白可以促进ENKL肿瘤细胞的增殖，并呈现时间和浓度依赖性。进一步研究提示，重组S100A9蛋白可以活化肿瘤细胞内P38-MAPK和ERK信号通路；应用p38-MAPK抑制剂则降低了S100A9对肿瘤细胞的促增殖作用。本课题应用血清蛋白质组学技术，筛选鉴定S100A9蛋白可以作为晚期ENKL患者疗效预测的标志物及独立的预后因素。S100A9通过激活细胞内的p38-MAPK和ERK信号通路促进肿瘤细胞增殖。这为临床患者个体化治疗、疗效检测及预后评估提供了新的途径。