逐痰化瘀法调控淋巴增生和功能对炎性关节炎的影响

炎性关节炎导致关节破坏，关节功能障碍，甚至残疾。关节炎症与淋巴系统的病理状态密切相关。本项目组前期在痰瘀证炎性关节炎的研究中，发现关节滑膜炎持久反复发作，局部炎性物质堆积，关节内软骨和骨的破坏，同时伴有淋巴增生和功能的改变，但淋巴功能的改变和关节炎症的关系还不清楚。.本研究拟利用转基因、基因敲除痰瘀证炎性关节炎模式小鼠和细胞，采用近红外线-吲哚青绿（NIR-ICG）淋巴功能检测技术和细胞学、病理学，分子生物学等技术，从NF-κB信号通路，研究痰瘀证炎性关节炎中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达变化及其引起的淋巴增生和功能改变与关节炎症程度的变化，寻找炎性关节炎的新的治疗靶点；在此基础上研究"逐痰化瘀"中药调控NF-κB信号通路对VEGF-C表达、对淋巴功能的调控以及对关节炎症程度的影响，探讨中医"痰瘀"与淋巴增生及功能之间的关系，深化"痰瘀理论"的现代生物学机制研究。

背景：类风湿关节炎严重影响患者的工作与生活。.研究内容：我们使用TNF转基因小鼠（TNF-Tg）作为RA关节炎动物模型，同窝WT小鼠作为对照组，2.5-3月龄TNF-Tg小鼠随机分组为生理盐水组、二陈汤+桃红四物汤组、阿魏酸低剂量组、阿魏酸高剂量组。各组在进行完ICG淋巴功能体内成像检测淋巴回流功能，以及症状评分后，分别给生理盐水、二陈汤+桃红四物汤、阿魏酸20ug/mL,和阿魏酸80ug/mL。在给药后1.5月和3月分别再次进行ICG淋巴功能体内成像检测，在给药后每两周进行临床症状评分，在给药后3月行ICG淋巴功能体内成像检测，取材：血清，腘窝淋巴结，双下肢胫骨。.重要结果：1. 2.5月龄时，TNF-Tg小鼠出现明显的关节炎肿胀、关节畸形等表现，与WT小鼠相比，TNF-Tg小鼠的淋巴回流功能和淋巴波动频率均显著降低，提示炎症性关节炎导致淋巴回流能力下降与前面研究结果一致。二陈汤+桃红四物汤可以促进淋巴回流功能，增加淋巴波动频率。阿魏酸也可以促进足底ICG淋巴清除率，促进淋巴管生成，促进淋巴波动频率。2. 临床症状评分检测发现二陈汤+桃红四物汤可以改善TNF-Tg小鼠踝关节畸形，促进踝关节背伸活动。阿魏酸80ug/mL治疗2周后可以减轻关节畸形程度，促进关节背伸活动度。3. 我们利用斑马鱼进行筛选，发现当归和川芎的有效成分阿魏酸（1uM， 10uM， 30uM）呈计量依赖性促进受损和未受损的淋巴管生成。4. 发现阿魏酸具有促进大鼠淋巴管内皮细胞成管的作用。5. 阿魏酸具有呈剂量依赖性促进淋巴管内皮细胞增殖的作用。6. Micro-CT结果显示，二陈汤+桃红四物汤可以改善TNF-Tg小鼠踝关节骨缺损情况；7. Trap染色显示阿魏酸均可以减轻TNF-Tg小鼠踝关节破骨细胞数目；8. ABHO染色显示阿魏酸均可以减轻TNF-Tg小鼠的骨缺损和软骨缺损；9. HE染色显示阿魏酸均可以减轻TNF-Tg小鼠的炎症浸润；10. 阿魏酸可以抑制TNFa诱导淋巴管内皮细胞产生NO，并间接抑制淋巴管内皮细胞分泌NO损伤平滑肌。.科学意义：具有逐痰化瘀功效的方剂与单体可以通过促进淋巴回流功能有效抑制类风湿关节炎。