Notch3参与上皮间充质化影响肝癌转移的机制研究

上皮间充质化与肿瘤细胞侵袭转移具有较明确相关性，而肝癌的转移复发机制尚不清楚。我们推测，细胞生长发育相关蛋白Notch家族成员之一- - Notch3受体蛋白，可能通过介导肝癌的上皮间充质化，从而促使肿瘤细胞的侵袭转移。为证实此推测，本研究将首先证实肝癌细胞膜上的Notch3过表达状态，以及与此平行的肝癌更差预后；用载体上调表达和RNAi技术干扰该蛋白的表达和功能，观察Notch3被上调和抑制表达前后肝癌细胞E-cadherin表达水平的变化、癌细胞体外转移侵袭能力的改变、以及裸鼠移植瘤增殖转移状况的差异等，以证实Notch3介导肝癌细胞上皮间充质转化这一信号途径的存在。再通过比较上调或下调表达前后的细胞内转录抑制因子等表达的变化，初步揭示Notch家族介导肝癌细胞侵袭转移的信号网络，探索肝癌治疗新的细胞膜上的靶点。

本项目以分析Notch3促进肝癌发展的分子机制为主要研究目标，力图为全面认识Notch3促进癌细胞转移这一重要问题提供重要线索。在具体课题研究设置上，包括了肝癌细胞间充质化进展的重要环节，包括Notch3在肝癌表达的特征和规律，肝癌受Notch3调节的分子机制，EMT受Notch3影响的调控机理、重要信号分子的致癌机制等。我们以实时定量RT-PCR、Western blot和免疫组化的方法，从mRNA和蛋白水平证实了Notch3在肝癌组织和肝癌细胞系中的表达比正常肝组织和正常肝细胞系中的表达高，而Notch1相反，与已有的报道一致。Notch2为低度高表达，Notch4在肝癌中呈不规则表达状态。故Notch信号通路调节肝癌细胞增殖和侵袭转移是通过Notch3和Notch2实现的。Notch3的高表达与肝癌的侵袭表型相关，即与 AFP、TNM 分期、肿瘤大小和肿瘤子灶等相关，同时通过结合无瘤生存率的分析，发现Notch3高表达和肝癌根治性切除术后无瘤生存率差相关，提示Notch3高表达可能与肝癌转移复发相关。而通过实验证实，vimentin的过表达能够代偿Notch3敲减引起的肝癌细胞迁移能力下降；而vimentin的敲减能够消除过表达Notch3引起的肝癌细胞迁移能力上升。因此，Notch3可参与的肝癌EMT信号作用途径，来影响肝癌细胞侵袭、迁移、转移，在转移形成过程中起到了重要的作用。