阿尔茨海默病患者外周血淋巴细胞P53介导的G1/S调控点功能障碍研究

阿尔茨海默病（Alzheimer's Disease, AD）又称"老年性痴呆"，迄今尚无能于疾病早期对其做出准确诊断的有效标志物。AD脑神经元细胞周期调控异常发生于"G1/S"调控点，但国内外尚未见AD外周组织G1/S调控点功能障碍及其机制的报道。本研究拟于前期实验基础上，进一步确证AD外周血淋巴细胞G1/S调控点功能障碍及"突变样"P53蛋白的表达，应用野生构型、突变构型P53特异性抗体标记细胞后行流式细胞分选，证实P53蛋白构型对G1/S调控点功能及P53下游调控基因：P21基因水平的影响情况，并对突变构型P53蛋白阳性细胞行P53基因测序分析，明确P53基因失活的形式，从而阐明P53基因在AD外周血淋巴细胞G1/S调控点功能障碍中的重要作用。本课题有可能建立两项AD新的外周标志物：外周血淋巴细胞G1/S调控点功能障碍及"突变样"P53蛋白的表达，将为AD早期诊断的研究提供思路。

本项目于前期工作基础上，扩大样本量，收集阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease, AD）、轻度认知障碍（Mild Congnitive Impairment，MCI）及正常健康者各200例，进一步确证AD外周血淋巴细胞G1/S调控点功能障碍及“突变样”P53蛋白的表达，证实了P53蛋白构型对G1/S调控点功能的影响情况，阐明P53蛋白在AD外周血淋巴细胞G1/S调控点功能障碍中的重要作用。本项目建立了两项AD新的外周标志物，标志物的检测具有无创性和简便性的优点，为AD早期诊断准确性的提高及新治疗靶点的开创提供思路。（1）用植物凝集素活化处于静止期的各组外周血淋巴细胞使其进入细胞循环，再进行雷帕霉素（阻止细胞由G1期向S期的转化）干预后应用流式细胞技术进行细胞周期分析。发现，与AD组相比，雷帕霉素于MCI组及对照组组中发挥出了更显著的G1期向S期转换的阻滞效应，提示：经雷帕霉素处理的AD组细胞呈现出较对照组不明显的G1期停滞现象，AD组细胞G1/S调控点功能障碍，建立了AD的外周标志物（之一）：外周血淋巴细胞G1/S调控点功能障碍。（2）应用野生构型、突变构型P53特异性抗体标记各组细胞，检测其P53蛋白构型状态，发现：AD组细胞除表达野生构型P53外，还检测到了异常水平的“突变样”P53蛋白，该“突变样”P53蛋白可作为鉴别AD与对照组，建立了AD的外周标志物（之二）：外周血淋巴细胞“突变样”P53蛋白。（3）流式细胞分选出：野生构型P53（+）细胞与突变构型P53（+）细胞。分别经植物凝集素、雷帕霉素处理后行细胞周期分析，对比其G1/S调控点功能的差异情况，发现：与突变构型P53（+）细胞相比，雷帕霉素于野生构型P53（+）细胞中发挥出了更显著的G1期向S期转换的阻滞效应，提示，突变构型P53（+）细胞其G1/S调控点功能障碍，证实了P53蛋白构型差异对G1/S调控点功能的影响。.本项目中每例病例外周血抽取后须24小时内进行淋巴细胞提取，工作量大。与前期工作相比较，本项目考核指标内容无明显变化，研究结果与前期工作结果一致，数据统计分析的图表格式与前期工作一致，但入组病例数由前期工作的45例增至600例。本项目通过三年研究工作，已全面完成计划内容。已发表国内核心期刊论著1篇，另有2篇论著已投SCI收录期刊，待回执。