宫颈癌干细胞的特异基因表达分析

基本信息
批准号:30973194
项目类别:面上项目
资助金额:30.00
负责人:王克芳
学科分类:
依托单位:首都医科大学
批准年份:2009
结题年份:2012
起止时间:2010-01-01 - 2012-12-31
项目状态: 已结题
项目参与者:李斌,王焕英,王虹,汪建军,范颖,蔡有芹,赵文娟,丁书芳
关键词:
宫颈癌肿瘤干细胞SP细胞基因芯片microRNA
结项摘要

对宫颈癌细胞进行原代培养,SP分选,通过对SP细胞和NSP细胞进行细胞增殖、分化、裸鼠成瘤、对放化疗敏感性等方面进行分析,证实宫颈癌SP细胞具有肿瘤干细胞特性;分别对宫颈癌SP和NSP细胞进行基因表达谱和microRNA表达谱比对、分析,用预测软件miRnada、TargetScan对差异表达microRNA进行靶基因预测,将预测出的基因与基因表达谱中的差异表达基因进行比对,既属差异表达基因、同时又在预测基因范围内的基因,我们将重点关注,视为关键差异表达基因,再经Real time RT-PCR和Western blot验证,初步确定宫颈癌干细胞的特异表达基因;对宫颈癌干细胞特异表达基因进行RNA干扰沉默其表达,或进行目的基因转染上调其表达,观察其生物学改变,从而确定宫颈癌干细胞特异基因,为宫颈癌治疗提供新靶点,为探索宫颈癌的干细胞治疗提供理论依据。

项目摘要

本课题通过采集宫颈鳞癌患者的手术标本,通过原代培养、流式细胞荧光激活分选法将宫颈癌细胞分为侧群细胞(SP)和非侧群细胞(NSP)两个亚群,观察两组细胞的体外增殖和成瘤能力,并比较两组细胞对化疗药物的耐受性。通过上述实验,证实人宫颈鳞癌SP细胞具有肿瘤干细胞特性。分别提取SP细胞和NSP细胞的总RNA,用microRNA芯片分别检测SP细胞和NSP细胞的microRNA表达谱并进行分析,筛选出差异表达的microRNA。 microRNA芯片筛选出表达差异在10倍以上的有16条microRNA,其中3条miRNA上调,13条miRNA下调;差异表达超过2倍的miRNA有7条,其中3条miRNA上调,4条miRNA下调。应用qPCR方法对上述差异表达microRNA进行验证,最终确定SP和NSP细胞的差异表达microRNA。miR-34a在宫颈癌SP细胞中表达下调,通过增加miR-34a在SP细胞表达,SP细胞增殖能力、克隆形成能力下降。

项目成果
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数据更新时间:2023-05-31

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