宫颈癌干细胞的特异基因表达分析

对宫颈癌细胞进行原代培养，SP分选，通过对SP细胞和NSP细胞进行细胞增殖、分化、裸鼠成瘤、对放化疗敏感性等方面进行分析，证实宫颈癌SP细胞具有肿瘤干细胞特性；分别对宫颈癌SP和NSP细胞进行基因表达谱和microRNA表达谱比对、分析，用预测软件miRnada、TargetScan对差异表达microRNA进行靶基因预测，将预测出的基因与基因表达谱中的差异表达基因进行比对，既属差异表达基因、同时又在预测基因范围内的基因，我们将重点关注，视为关键差异表达基因，再经Real time RT-PCR和Western blot验证，初步确定宫颈癌干细胞的特异表达基因；对宫颈癌干细胞特异表达基因进行RNA干扰沉默其表达，或进行目的基因转染上调其表达，观察其生物学改变，从而确定宫颈癌干细胞特异基因，为宫颈癌治疗提供新靶点，为探索宫颈癌的干细胞治疗提供理论依据。

本课题通过采集宫颈鳞癌患者的手术标本，通过原代培养、流式细胞荧光激活分选法将宫颈癌细胞分为侧群细胞（SP）和非侧群细胞（NSP）两个亚群，观察两组细胞的体外增殖和成瘤能力，并比较两组细胞对化疗药物的耐受性。通过上述实验，证实人宫颈鳞癌SP细胞具有肿瘤干细胞特性。分别提取SP细胞和NSP细胞的总RNA，用microRNA芯片分别检测SP细胞和NSP细胞的microRNA表达谱并进行分析，筛选出差异表达的microRNA。 microRNA芯片筛选出表达差异在10倍以上的有16条microRNA，其中3条miRNA上调，13条miRNA下调；差异表达超过2倍的miRNA有7条，其中3条miRNA上调，4条miRNA下调。应用qPCR方法对上述差异表达microRNA进行验证，最终确定SP和NSP细胞的差异表达microRNA。miR-34a在宫颈癌SP细胞中表达下调，通过增加miR-34a在SP细胞表达，SP细胞增殖能力、克隆形成能力下降。