肝胆运输系统在胆道闭锁肝纤维化进展过程中的作用

胆道闭锁患者在行成功的引流手术后，有约三分之二的病人肝纤维化仍继续进展成肝硬化而需要行肝移植手术。这一问题受到广泛关注，但对于其机制的研究还没有确切的结论。在前期工作中，从胆道闭锁动物模型中观察到早期的肝损害和纤维化，炎症反应和肝胆运输基表达的变化。在本研究中，进一步研究肝胆运输系统在胆道闭锁形成中和形成后的变化，以及在疾病发展过程中肝纤维化的进展，明确肝胆运输系统相关因子的表达水平与肝纤维化程度的相关性； 最后通过采用Farnesoid X receptor(Fxr)激活剂干扰小鼠胆道闭锁模型，明确调节肝胆运输系统起关键作用的核受基Fxr对肝纤维化进展的影响。预期结果为明确肝胆运输系统在胆道闭锁肝纤维化进展中的作用，为临床提出有效干预肝纤维化进展的治疗方法提供有意义的理论依据。

本课题主要研究胆道闭锁的病理机制，验证了炎症介导的肝胆运输基表达改变和肝内胆酸淤积的发生早于胆道闭锁的形成这一假说，同时阐明肝内胆管上皮细胞向肝间质细胞的转化和Hedgehog 信号通路参与肝纤维化的发展过程，Farnesoid X receptor(Fxr)具有直接或者间接作用诱导Bsep表达。. 胆道闭锁的动物模型是通过采用轮状病毒Rhesus Rotavirus (RRV)（MMU18006）腹腔注射出生18小时后新生小鼠（Balb/c）建立。.首先，体外观察轮状病毒对胆管上皮细胞的攻击及炎症因子、肝胆运输基的表达影响。在该动物模型上证实了肝纤维化开始于胆道闭锁发展的早期。胆道闭锁模型建立7天后，门静脉周围的纤维化已经出现炎症反应，胆道梗阻尚未发生，然而胶原蛋白Ⅰ，aSMA,和Tgf-β1的mRNA水平高表达。该阶段，肝汇管区可检测到S100a4表达，表明胆管上皮细胞向肝间质细胞的转化现象也同时出现，同时Indian Hedgehog 信号通路的靶基因Gli-2和受体蛋白也被检测到，此时肝外胆道梗阻尚未形，然而肝脏纤维化的过程已经发生。随后，做了炎症对肝胆运输基的影响研究。炎症导致肝胆运输基相关基因下调，从而导致了肝内胆汁淤积。这是导致肝脏纤维化早期发生的主要原因。mRNA水平检测肝胆运输基和核受基在炎症作用下的变化，以及不同时间节点的变化。与正常对照组相比，BA组Fxr和Shp表达下降，14天时差异具有显著性，21天后，它们表达再次增高，与正常对照无显著性差异。Bsep下调与Fxr低表达一致，14天时差异具有显著性。相同的模式也见于Pxr表达，虽然与正常对照的差异不明显。与正常对照相比，BA组Ntcp表达低，14天时差异具有显著性。与Ntcp不同，Oatp1表达水平在整个实验阶段无明显变化。最后，用FXR增强剂GW4046处理胆道闭锁的模型动物，在组织切片可观察到胆管增殖、肝细胞坏死均减少，同时发现Fxr可以显著上调BSEP的表达。. 该研究达到了课题设计的预期，验证了假说，阐明了肝胆运输系统在胆道闭锁肝纤维化进展中的发展机制，Fxr具有有效干预肝纤维化进展的价值。