人SCF基因5’调控序列的克隆及功能研究

摘要 应用荧光素酶报告基因系统及EMSA方法研究人干细胞因子基因的顺式作用元件。首先，通过RT-PCR和序列分析证实hSCF基因在MCF细胞和HeLa细胞中均存在表达。然后用基因剔除法构发真空hSCF基因5’旁侧-162～-1190不同缺失长度片段的重组luc报告基因载体，瞬时转染MCF和HeLa细胞。结果表明：hSCF基因5’旁侧-1190～-853片段在这两种细胞中显著增强分别由hSCF核心启动子（+181～-162）和SV40启动子引导的luc基因表达，-339～-273则显著性抑制luc基因表达；而单独的-1190～-853和-339～-273并无启动子的活性。hSCF核心启动子（+181～-162）比SV40启动子对luc基因具有更强的转录活性。进一步-11290～-853，-339～-273及-181～-162为探针的EMSA实验显示这三个区域均有特异性滞留区带形成，说明这三个区域均存在转录因子的特异性结合位点。这些结果提示hSCF基因5’旁侧-1190～-853和-339～-273DNA片段为hSCF基因两个新的顺式作用元件。对hSCF基因的转录发挥调控作用；hSCF核心启动子（+181～-162）具有较强的转录活性，为基因治疗选择启动子提供了依据。