吴茱萸有效成分的累积和转化规律与其资源品质的相关性研究

Euodiae Fructus is a commonly used traditional Chinese medicine. There are three plant origins (Euodia rutaecarpa and its two varieties ) of Euodiae Fructus provided in the Chinese Pharmacopoeia (1977-2010 edition), while the three plant origins have been combined and given another latin name (Tetradium ruticarpum) in the Flora of China (2009 edition). The main chemical constituents are greatly different among the three species in the literatures, and our research group found interconversion between some constituents, but psbA-trnH sequence of chloroplast and ITS2 sequence of nucleal were identical. Thus, how shoud the Chinese Pharmacopoeia do next, remain unchanged or agree with the Flora of China?.For this reason, we plan to collect a large number of samples from the three species, which include the same and different producing area, different maturity, different tree-age, different processing, etc. The structure types and content of effctive constituents will be compared to summarise the law of production, accumulation, inversion of the constituents. According to the results, typical samples will be selected to carry out pharmacological activities and acute toxicity to assure its effectiveness and safety in clinical application.

吴茱萸为常用中药，历版中国药典规定其法定来源有3种：吴茱萸(Euodia rutaecarpa)及其变种石虎和疏毛吴茱萸，而新版Flora of China将该三个品种归并为Tetradium ruticarpum。国内外研究已证实它们的主要成分差异很大，我们证实其主要成分间存在消长关系，但三种原植物的叶绿体psbA-trnH序列和核ITS2序列结果又无差异。那么，作为法典的中国药典是继续保留现状还是更新为T. ruticarpum？ .为此，本课题拟通过对相同和不同产地、不同成熟期、不同生长年限、不同产地初加工等的三种吴茱萸样本进行系统的实地采集，并进行多成分的分析比较，找出这些有效成分在三种吴茱萸中产生、累积、转化、消长规律；依据结果，选取各自代表性样品进行进一步的药效学验证和安全性评价，为保证临床用药的有效性和安全性提供证据，为沟通药典和植物志提供示范性实例。

本项目以中国药典收载的三种吴茱萸为研究对象，通过对大量样本开展多成分评价，揭示有效成分群的累积、转化规律，并结合药效学比较三种吴茱萸的品质差异，以期解决中国药典和Flora of China对其品种“分”或“合”的矛盾。.实地调研9省21地，采集吴茱萸样品166批，并进行基原鉴定。从吴茱萸果实中分离鉴定了42个化合物，包括17个生物碱，14个黄酮，5个酚酸，2个柠檬苦素。其中，2个为新化合物，12个为首次从该属植物中分离得到。并对部分化合物开展抗斑马鱼血管生成活性筛选。.以18个有效成分为指标，建立了吴茱萸UPLC-DAD定性定量分析方法，对49批近成熟吴茱萸果实进行测定。以12个挥发性成分为指标，建立了挥发油GC-MS定性定量分析方法，对27批吴茱萸近成熟果实进行测定。结合统计学方法进行数据分析和品质评价。采用建立的方法，进一步对三种吴茱萸不同成熟期果实30批进行定量比较，明确了有效成分的累积、转化、消长规律。.有效成分群在三种吴茱萸中累积转化规律基本一致，品种间没有差异。在果实生长期内，酚酸、柠檬苦素、去氢吴茱萸碱及挥发油中倍半萜类成分均呈下降趋势；其他吲哚生物碱、喹诺酮生物碱、黄酮及挥发油中单萜类成分均呈上升趋势。不同类型成分此消彼长，至果实近成熟期接近平衡状态。其中，柠檬苦素的含量随着果实成熟而不断降低，直至消失。.多成分质量评价结果表明，三种吴茱萸化学成分类型基本一致，成分含量变化大，但品种间没有明显差异。同一品种的吴茱萸、石虎或疏毛吴茱萸，受产地、环境、采收时间等因素影响，成分含量可在较大范围内波动。多种因素造成的种内差异大于或等于品种不同导致的种间差异。其中，采收时间的影响最为显著，远大于品种、产地此二因素。.药效学研究结果表明，三种吴茱萸均有一定的镇痛、抗炎作用，黄酮和生物碱都是其药效成分。镇痛效果以疏毛吴茱萸最强，吴茱萸最弱；抗炎效果以石虎最强，疏毛吴茱萸最弱。挥发油抗菌活性以吴茱萸最强，疏毛吴茱萸最弱。三种吴茱萸的药理作用因有效成分的含量及比例差异而有所侧重，但综合效果没有显著差异。三种吴茱萸的急性毒性试验结果一致，均未见任何毒性表现。.总之，三种吴茱萸在化学成分、传统功效等方面没有显著差异。支持将目前中国药典收载的三种吴茱萸合并。控制吴茱萸药材质量的关键是把握“近成熟”这一采收时间环节。研究结果为国家药典会修订药材标准及临床用药提供依据和参考。