卡波西肉瘤病毒RTA与TLE2相互作用及其功能意义的研究

卡波西肉瘤相关疱疹病毒（KSHV）是最新鉴定的一种人类肿瘤病毒，是引起艾滋病患者中常见的恶性肿瘤如卡波西肉瘤等疾病的病因。KSHV ORF50编码的重要功能蛋白RTA在该病毒感染及生命周期调控的过程中起主导作用，研究RTA与宿主蛋白间相互作用有助于揭示KSHV的致病机制。本研究的前期工作通过酵母双杂交试验发现RTA与高度保守的转录协同抑制分子TLE2存在相互作用，且TLE2对RTA的转录激活功能存在抑制作用，由此我们提出如下工作假说，即KSHV RTA与TLE2的相互作用有助于KSHV在感染细胞的过程中建立并维持长期、持续的潜伏态感染。本研究围绕这一假说，拟进一步探索1）KSHV RTA与TLE2相互作用的最小功能域；2）两者相互作用在KSHV建立和维持潜伏态感染的过程中的功能意义及可能的分子机制。本研究将有望发现KSHV与宿主相互作用的新机制，为KSHV相关肿瘤的防治奠定重要的理论基础。

通过酵母双杂交筛选人脾细胞cDNA文库，我们发现TLE家族成员TLE2能够与RTA结合。这种相互作用经GST结合实验和免疫共沉淀实验验证。在免疫荧光实验中，TLE2与RTA呈现出相似的亚细胞定位，TLE2虽然缺乏DNA结合活性，但可以通过与RTA的相互作用募集于RTA下游基因启动子，形成TLE2/RTA转录抑制复合体，抑制RTA介导的转录激活及病毒裂解复制。TLE2的Q，SP及WDR结构域能与RTA的富含脯氨酸的结构域结合介导蛋白间的相互作用。TLE2能与RBP-jk竞争结合相同的RTA结构域可能是TLE2抑制RTA转录激活租用的机制。特别的，RTA能够上调宿主细胞中TLE2的表达水平，从而实现RTA的负反馈调控，在病毒潜伏感染建立与维持中发挥作用。