参知健脑方对缺氧致AD细胞及动物模型线粒体损伤的保护机制的实验研究

This project will establish SH-SY5Y cell mitochondrial damaged cell model and Wister rats intellectual declined animal models by lack of oxygen, and then observe the curing mechanism of Chinese medicine component (SZJ). Through morphological observation, the spectrophotometer, flow cytometry, Western blot analysis, PCR and image analysis methods, observating hypoxia on mitochondrial membrane potential, respiratory chain complex enzyme I and IV activity of mitochondrial DNA, Formation of beta-amyloid precursor protein and mitochondria within the above index, explore the neuronal mitochondrial damage and mitochondrial damage of major organs , by the above observation, study the protective of SZJ on mitochondrial damge when hypoxia on models. Then explore the possibility of mitochondria as Chinese medicine, "the material basis of the gas.

本项目通过缺氧建立SH-SY5Y细胞线粒体损伤细胞模型及Wister大鼠智能下降动物模型，研究中药组分配伍参知健脑方（SZJ）治疗Alzheimer's病的作用机制。造模给药后，通过形态学观察、分光光度计、流氏细胞仪、Western blot、PCR和图像分析等方法，观察缺氧对线粒体膜电位、呼吸链复合酶Ⅰ、Ⅳ活性、线粒体DNA、β-淀粉样蛋白前体蛋白和β-淀粉样蛋白生成的影响，并观察肝、心、脾、肺、肾组织中线粒体内上述指标的变化，探讨神经元线粒体损伤与主要脏器线粒体损伤的相关性，通过上述观察，研究中药组分配伍参知健脑方对缺氧致线粒体损伤细胞模型及动物模型的保护作用，探讨线粒体作为中医"气"的物质基础的可能性。

建立缺氧致线粒体损伤的神经细胞和大鼠AD模型，提取细胞线粒体的DNA 和大鼠重要脏器的线粒体DNA，进行线粒体能量代谢异常、8-OHdG产物含量、线粒体内淀粉样前体蛋白含量及β淀粉样蛋白表达等方面指标检测，观察缺氧时脑神经元及重要脏器线粒体的变化，及中药复合物参知健脑方（SZJ组成：人参、知母、芍药）保护线粒体的机制。结果表明：细胞实验部分，参知健脑方从细胞存活率和形态方面，都明显改善了细胞缺氧损伤，与西药多奈哌齐无显著性差异；8-OHdG水平较缺氧组有明显减少，提示中药SZJ可以减轻缺氧对线粒体DNA的损伤；中药SZJ预处理的细胞线粒体内的βAPP水平相比缺氧组没有明显改善，但是Aβ含量有显著降低，其效果和西药处理组无显著性差异。动物实验部分，缺氧致Aβ产生增多刺激脑组织中的神经细胞，大量Ca2+内流超载，线粒体肿胀功能紊乱，造成mtDNA缺失或突变，8-OHdG产量增多，COX发生特异性下降。过度积累的Aβ使线粒体丧失部分生理功能，甚至促使神经元细胞凋亡。结论：中药参知健脑方可以提高线粒体功能，增强线粒体的物质代谢，进而提高对缺氧所致的脑损伤的保护作用，线粒体很可能就是中医“气”在人体内进行生化、代谢的物质基础，为进一步探讨五脏“虚证”的相关性提供了生物学基础和实验室依据。