冠心病血瘀证血小板差异蛋白分析及川芎有效成分靶向干预机制

动脉粥样硬化斑块破裂处血小板活化及继发血栓形成是导致急性冠脉事件的重要病理基础。尽管现代抗血小板治疗进展显著，仍存在诸如阿司匹林抵抗、氯吡格雷抵抗或无反应、出血风险等难点问题亟待解决。因此，寻找新的有效抗血小板药物一直是冠心病防治研究领域的世界性关注点。.本项目以冠心病血瘀证患者血小板功能蛋白为切入点，以健康志愿者和冠心病非血瘀证为对照，采用荧光差异显示双向凝胶电泳（2D-DIGE）结合质谱等蛋白质组学方法，建立冠心病血瘀证患者血小板特异功能蛋白的差异表达谱，分析、筛选和鉴定冠心病血瘀证血小板活化差异表达蛋白。在此基础上，观察活血化瘀中药川芎有效成分川芎总酚对活化血小板膜糖蛋白受体和差异蛋白质表达的影响，深入研究其抗血小板作用的靶点及机制。该项目对寻求新的抗血小板治疗潜在靶标和从传统活血化瘀方药中发现用于冠心病一级预防和二级预防的抗血小板药物，具有重要的科学意义和临床应用价值。

血小板活化及继发血栓形成是导致急性冠脉事件的重要病理基础。现代抗血小板治疗尽管进展显著，仍存在药物抵抗、出血风险等问题亟待解决。蛋白质组学的发展为寻找新的抗血小板药物靶标提供了可能。本项目以冠心病血瘀证患者血小板差异蛋白为切入点，以冠心病非血瘀证及健康志愿者为对照，采用荧光差异显示双向凝胶电泳结合质谱技术筛选鉴定各组间血小板差异蛋白。结果：冠心病血瘀证与健康对照组之间的差异蛋白有7个：Isoform 1 of Integrin alpha-Ⅱb、Isoform 2 of Integrin alpha-Ⅱb均是血小板膜蛋白CD41的亚型；Actin-cytoplasmic 2（Actin γ）为血小板骨架蛋白的组成部分；其余4个均为Actin其他亚型或修饰产物。说明除血小板膜蛋白外，骨架蛋白在血小板活化进程中的作用不可忽视。在冠心病血瘀证与冠心病非血瘀证组间筛选到10个差异蛋白：cDNA FLJ53327（Gelsolin）、cDNA FLJ43573 fis在冠心病血瘀证组表达增多；Isoform 2 of Integrin alpha- IIb、Fibrinogen ß chain、Actin-cytoplasmic 1、Actin-cytoplasmic 2、cDNA FLJ52842、Keratin type I （cytoskeletal 10）、FGG 50 kDa protein、A26C1B ANKRD26-like在冠心病血瘀证组表达减少。在冠心病非血瘀证与健康对照组间筛选到6个差异蛋白，前4个是血小板骨架蛋白或其类似物，其余2个可能是新蛋白。进一步采用Western-Blotting进行验证，发现冠心病血瘀证血小板Fibrinogen ß和CD41蛋白表达低于非血瘀证组，而Gelsolin表达却高于非血瘀证组。推测冠心病血瘀证患者血小板可结合的纤维蛋白原减低，在相对偏高的血浆纤维蛋白原环境下，加之Gelsolin高表达，其在Ca2+参与下调控血小板骨架蛋白重构，导致血小板变形，参与血栓形成。以感兴趣的血小板骨架蛋白Gelsolin为靶标，研究川芎有效成分的体外抗血小板作用，结果发现川芎嗪能降低血小板体外活化时Gelsolin表达，提示Gelsolin可作为活血化瘀中药的潜在作用靶标。该项目对从传统活血化瘀方药中发现新的抗血小板药物具有重要意义。